真姬菇子实体多糖的提取、纯化及抗氧化性研究

论文摘要

真姬菇又名蟹味菇、玉蕈、鸿禧菇等,是一种很有开发价值和应用前景的珍稀食药用真菌,以其独特的营养价值和抗肿瘤、提高免疫力等药用功能而成为新近研究的热点。本文以真姬菇子实体为材料,对其多糖的提取、分离纯化、抗氧化活性进行了研究,取得以下主要结果:1.以水为浸提液,通过单因素试验研究了浸提温度、浸提时间、液固比、乙醇用量和提取次数对真姬菇多糖得率的影响,并采用二次回归正交旋转组合设计试验对提取工艺进行优化。结果表明,多糖得率的主要影响因素及其主次顺序为浸提温度、浸提时间、液固比;在乙醇用量为2倍、提取次数为1次时,最佳提取工艺参数为浸提温度95℃、浸提时间2.84h、液固比11.6:1,多糖得率为4.47%。2.经过对Sevag法、TCA法、胰蛋白酶法脱蛋白效果的比较,结果表明胰蛋白酶法效果较好。向多糖溶液中加入0.4倍多糖溶液体积的胰蛋白酶溶液（1mg/mL）,保持pH6.0左右,在37℃±1℃水浴条件下酶解2h,蛋白质脱除率为87.69%,多糖保留率为89.04%。3.透析后的真姬菇子实体多糖经DEAE-Sephadex A-25柱层析,用不同溶剂洗脱后分别得到灰白色、白色、淡黄色、灰白色4个多糖组分,经纸层析、Sephadex G-200凝胶柱层析、紫外光谱鉴定,均为单一组分。紫外光谱结果表明,4个多糖组分均不含核酸和蛋白质等杂质。4.真姬菇粗多糖（HMⅠ）、脱蛋白粗多糖（HMⅡ）对O2-·有一定清除效果;对Fenton体系产生的·OH有较好的清除效果,比Vc稍低,且HMⅠ对·OH清除率较HMⅡ高;在DPPH·体系中,在浓度小于2.2mg/mL时,HMⅠ与HMⅡ清除率小于Vc,高于此浓度时大于Vc,但两者对DPPH·清除率基本没有差别;HMⅠ与HMⅡ均有一定的还原能力。HMⅠ、HMⅡ对·OH清除能力和对Fe3+还原能力的IC50值达到了极显著;对DPPH·清除能力的IC50值达到了显著水平。HMⅠ抗氧化活性显著高于HMⅡ,亦即未脱蛋白多糖的抗氧化活性显著高于脱蛋白多糖。本文创新点:首次建立了真姬菇子实体多糖的热水提取工艺及模型,并通过脱蛋白、柱层析等建立了真姬菇子实体多糖的分离纯化工艺。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 多糖的研究进展
• 1.1.1 多糖的提取
• 1.1.2 多糖的分离
• 1.1.3 多糖的纯化
• 1.1.4 多糖纯度和分子量的测定
• 1.1.5 多糖的结构分析
• 1.1.6 多糖的药理作用及其研究现状
• 1.1.7 多糖的构效关系
• 1.2 真姬菇的研究现状
• 1.2.1 概述
• 1.2.2 真姬菇的营养成分
• 1.2.3 真姬菇的药效
• 1.3 本研究的目的、意义和内容
• 1.3.1 目的与意义
• 1.3.2 试验内容
• 第二章 真姬菇子实体多糖提取工艺的研究
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 试剂
• 2.1.3 仪器和设备
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 多糖含量的测定
• 2.2.2 单因素试验
• 2.2.3 二次回归正交旋转组合试验
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 各单因素对多糖得率的影响
• 2.3.2 二次回归正交旋转组合试验
• 2.4 讨论
• 2.5 小结
• 第三章 真姬菇子实体多糖的分离纯化研究
• 3.1 试验材料
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 试剂
• 3.1.3 仪器和设备
• 3.2 试验方法
• 3.2.1 真姬菇多糖分离纯化工艺流程
• 3.2.2 多糖含量的测定
• 3.2.3 蛋白质含量的测定
• 3.2.4 脱蛋白
• 3.2.5 脱色
• 3.2.6 透析
• 3.2.7 真姬菇多糖DEAE-Sephadex A-25 柱层析纯化
• 3.2.8 真姬菇多糖的纯度鉴定
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 脱蛋白方法对蛋白脱除率和多糖保留率的影响
• 3.3.2 粗多糖的纯化结果
• 3.3.3 多糖纯度的鉴定结果
• 3.4 讨论
• 3.5 小结
• 第四章 真姬菇子实体多糖的体外抗氧化性研究
• 4.1 试验材料
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 药品和试剂
• 4.1.3 仪器和设备
• 4.2 试验方法
• 4.2.1 真姬菇子实体多糖的制备
• 2^-·清除率测定'>4.2.2 O₂^-·清除率测定
• 4.2.3 ·OH清除率测定
• 4.2.4 DPPH·清除能力测定
• 4.2.5 还原能力测定
• 4.3 结果与分析
• 2^-·的清除效果'>4.3.1 真姬菇子实体多糖对O₂^-·的清除效果
• 4.3.2 真姬菇子实体多糖对·OH 的清除效果
• 4.3.3 真姬菇子实体多糖对DPPH·的清除效果
• 4.3.4 真姬菇子实体多糖的还原能力
• 4.3.5 HMⅠ与HMⅡ抗氧化性的IC50 值比较
• 4.4 讨论
• 4.5 小结
• 第五章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介