论文摘要
目的研究金银花（Flos lonicerae,FL）提取物对小鼠T细胞行为和脓毒症的影响,探讨其对脓毒症小鼠的保护作用机制,为其在临床的应用提供参考数据和理论依据。方法1.体外结合流式细胞术利用荧光标记的单克隆抗体染色,检测FL对多克隆刺激剂刀豆蛋白A（Concanavalin A,Con A）刺激的小鼠淋巴细胞活化的影响;利用羧基荧光素二乙酸琥珀酰亚胺酯（CFDA-SE）染色分析FL对淋巴细胞增殖情况的影响;碘化丙锭（PI）染色分析FL对淋巴细胞周期分布的影响。2.腹腔注射大肠杆菌（escherichia coli,E.coli）建立脓毒症模型,观察FL对小鼠生存状况的影响,分析各处理组小鼠胸腺、脾脏细胞总数,计算小鼠胸腺和脾脏指数,AnnexinV-FITC/PI双染检测FL对小鼠胸腺细胞凋亡的影响,使用CFDA-SE标记的大肠杆菌（E.Coli）结合流式细胞术检测FL对小鼠腹腔Mφ吞噬功能的影响。3.利用腹腔注射LPS/D-半乳糖建立内毒素诱导脓毒症模型,采用MTT比色法检测FL对脓毒症小鼠淋巴细胞增殖的影响,通过H2DCFDA染色检测外周血反应性氧族（reactive oxygen species,ROS）变化,利用H2O2测定试剂盒检测小鼠血清中H2O2的水平,通过血液生化和病理组织学检查,观察FL对小鼠肝功能的保护作用,结合体外试验,利用Griess反应试剂盒检测FL对脂多糖（LPS）激活的Mφ释放NO的影响。结果1.细胞活化分析结果表明,金银花提取物对小鼠淋巴细胞活化和增殖均有明显的抑制作用（P＜0.05）,并且能明显阻止淋巴细胞进入S期和G2/M期。2.大肠杆菌诱导的脓毒症小鼠胸腺和脾脏出现显著的萎缩现象;与此同时,药物治疗组小鼠胸腺和脾脏指数明显增加,结合体外实验,FL对DEX诱导的小鼠胸腺细胞凋亡都有显著的拮抗作用（P＜0.01）;小鼠存活率亦显著提高（P＜0.01）;腹腔巨噬细胞的吞噬功能明显增强。3.利用内毒素诱导D-半乳糖致敏脓毒症模型,结果分析表明,与正常组相比,淋巴细胞对Con A诱导应答能力明显下降,外周血中性粒细胞ROS显著升高,血清中ALT、AST和H2O2水平亦增加,肝组织炎性细胞水平显著升高,肝脏出现病理损伤,而药物治疗组对增殖反应明显强于单纯模型组,外周血中性粒细胞ROS、血清中ALT、AST和H2O2水平均显著降低,肝组织炎性细胞水平减轻,Griess反应检测结果显示,FL明显抑制LPS激活巨噬细胞释放NO的量（P＜0.05）。结论1.FL能明显抑制小鼠淋巴细胞的体外活化和增殖,并能抑制淋巴细胞进入细胞分裂周期,提示FL对特异性细胞免疫有重要抑制作用,这可能是FL作为临床常用药物治疗免疫相关疾病的理论基础。2.抑制胸腺和脾脏细胞凋亡和增强腹腔巨噬细胞吞噬功能可能FL对大肠杆菌所致脓毒症小鼠的保护机制。3.清除氧自由基和提高脓毒症小鼠淋巴细胞免疫应答能力可能是FL对内毒素诱导的脓毒症小鼠的免疫保护机制。