重组蓝藻抗病毒蛋白-N抗HSV-1活性的研究

论文摘要

目的探讨重组蓝藻抗病毒蛋白N抗单纯疱疹病毒1型（HSV-1）的作用及可能机制,为进一步开发该药提供理论依据。方法选用HSV-1标准株(SM44株)进行了CV-N体内及体外病毒活性的研究。体外实验在Vero细胞中进行,以不同剂量的CV-N作用于HSV-1复制周期的各个阶段,通过观察药物毒性、细胞病变效应（CPE）、MTT比色法检测细胞增殖,荧光定量PCR（FQ-PCR）及原位分子杂交,判断CV-N的细胞毒性及其抗病毒效果。体内实验以HSV-1进行脑内局部接种,制备小鼠疱疹性脑炎模型,观察CV-N对感染小鼠的治疗作用,以每组小鼠死亡率和平均存活日作为疗效指标,同时取脑组织标本进行HE染色观察细胞病变。结果CV-N对Vero细胞的增殖无明显作用,对Vero细胞毒性较低,半数毒性浓度TC50为359μg/ml;CV-N对HSV-1无直接抑制作用,可干扰HSV-1向Vero细胞的吸附,但没有达到完全抑制;CV-N可有效地抑制病毒的复制,使感染HSV-1的Vero细胞存活率明显提高。FQ-PCR结果显示表明随着CV-N浓度及作用时间的增加,CV-N对HSV-DNA的抑制作用明显增强,具有良好的剂量和时效关系。原位杂交结果表明CV-N作用的HSV-1感染组,其糖蛋白gB mRNA的表达明显低于病毒对照组,随着作用时间的增加,其抑制作用明显增加。体内实验结果表明CV-N可以显著提高疱疹性脑炎小鼠的存活率,并减轻脑组织的病理改变。结论CV-N抗HSV-1作用机制与阻滞病毒向细胞吸附、抑制病毒的复制、抑制包膜糖蛋白gB基因的转录等有关。CV-N在体内、外均具有良好的抗病毒活性,值得进一步研究开发。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一章 材料与方法
• 1.1 主要药品及试剂配制
• 1.2 主要设备及仪器
• 1.3 细胞株和病毒株
• 1.4 单纯疱疹病毒1型（HSV-1）的接种与收集
• 1.5 病毒滴定的测定
• 1.6 重组CV-N对Vero细胞毒性测定
• 1.7 重组CV-N抗HSV-1的体外作用
• 1.8 重组CV-N抗HSV-1作用的体内实验
• 第二章 结果
• 2.1 病毒滴定的测定
• 2.2 重组CV-N对Vero细胞的直接作用
• 2.3 重组CV-N体外抗病毒作用
• 2.4 重组CV-N抗HSV-1作用的体内实验
• 第三章 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 攻读学位期间的研究成果
• 附录
• 致谢