胃癌相关基因GCRG213在真核细胞的定位及其对MKN45细胞的作用

论文题目: 胃癌相关基因GCRG213在真核细胞的定位及其对MKN45细胞的作用

论文类型: 博士论文

论文专业: 老年消化系疾病

作者: 高利利

导师: 王孟薇,吴本俨

关键词: 胃癌相关基因,真核表达,胃癌细胞,基因转染,干扰,细胞生长,细胞凋亡,细胞成瘤性,化疗药物,透射电镜

文献来源: 中国人民解放军军医进修学院

发表年度: 2005

论文摘要: 胃癌相关基因GCRG213是由本实验室应用荧光标记的mRNA差异显示(DDRT-PCR)技术筛选出一条在肠型胃癌组织、癌旁和正常组织间差异表达的新基因,生物信息学分析表明它具有完整的开放阅读框架,编码含有142个氨基酸的产物。原位杂交和Nortbern blot显示该基因在胃癌和癌旁不典型增生组织的表达高于正常胃组织。同源比对,该基因与机体中碱基切除修复的关键酶APE/Ref-1序列有61%同源性并且含有其保守区的功能位点,可能是APE/Ref-1的一个变异体。APE/Ref-1(apurinic/apyrimidinic endonucleas)即人类无嘌呤无嘧啶核酸内切酶,是修复AP位点的关健酶,它还有调节参与细胞增殖、分化的转录因子活性的作用。近年来研究表明,APE/Ref-1与肿瘤的发生发展关系密切,其表达在前列腺、卵巢、子宫、结肠、生殖细胞等多种恶性肿瘤中明显增高,且可以协助判断一些肿瘤的预后。因此明确胃癌相关基因GCRG213的功能,对胃癌的发病机制、诊断治疗及预后判断将提供新的思路和手段。目的:研究胃癌相关基因GCRG213在真核细胞的定位及其正义、反义、siRNA转染对胃癌细胞MKN45的影响方法: 1、采用PCR技术,从pGEM-T质粒上选择性扩增出包含完整ORF在内的人胃癌相关基因GCRG213的DNA片段,将目的片段两端分别引入限制性内切酶PstI和BamHI识别位点,克隆至真核表达载体pEGFP-N1。 2、将测序正确的阳性重组子pEGFP-N1-GCRG213采用脂质体瞬时转染COS-7细胞,激光共聚焦技术检测GCRG213基因在真核细胞内的蛋白定位。 3、将从pGEM-T质粒上扩增出的胃癌相关基因GCRG213的DNA片段,两端分别引入限制性内切酶KpnI、BamHI和EcoRI、BamHI识别位点,按正向、反向克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)。 4、设计两对针对GCRG213可转录为小干扰RNA(siRNA)的DNA片段,

论文目录:

缩略词语表

中文摘要

英文摘要

前言

1 胃癌相关基因GCRG213在真核细胞的定位

1．1 材料

1．2 方法

1．3 结果

1．4 讨论

2 胃癌相关基因GCRG213及其siRNA在胃癌细胞MKN45中的表达和鉴定

2．1 材料

2．2 方法

2．3 结果

2．4 讨论

3 胃癌相关基因GCRG213对胃癌细胞恶性生物学行为的影响

3．1 材料

3．2 方法

3．3 结果

3．4 讨论

小结

参考文献

文献综述

攻读学位期间发表文章情况

致谢

发布时间: 2005-07-15

参考文献

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