鹅肉多肽的制备及其抗氧化活性的研究

论文摘要

近些年,关于蛋白质水解物抗氧化活性的研究报道日渐增多,说明蛋白中可能蕴含着具有抗氧化活性的肽序列,鹅肉是一种低脂肪、低胆固醇、高蛋白质的营养健康食品,并且我国养鹅总量占世界养鹅总量的93%,具有丰富的鹅肉资源,本研究采用蛋白酶酶解鹅肉蛋白,首次发现其产物具有抗氧化活性,因而采用鹅肉制备抗氧化肽,对于提高农业综合效益,延长鹅肉加工产业链,促进功能食品的开发等方面有着重要的意义。本课题以鹅肉为原料,利用酶法提取鹅肉抗氧化肽并进行相关研究。1.实验确定了酶解鹅肉蛋白的最佳用酶为碱性蛋白酶。利用单因素和响应面法优化鹅肉抗氧化肽的最佳工艺条件为：温度53℃、水解pHH10.5、固液比1：3、水解时间7.2h,加酶量1200U/g,在此条件下水解鹅肉蛋白,水解度可达34.74%,对Fe3+还原力为0.402。2本实验运用SephadexG-25和G-15对鹅肉多肽制备抗氧化肽的分离条件进行优化,确定了上样体积为2mL、上样浓度为100mg/mL、洗脱速度为0.6mL/min时,鹅肉多肽分离效果最佳。鹅肉粗肽粉经SephadexG-25在最佳分离条件下层析可得四个组分,其中组分3的三价铁离子还原力和清除DPPH自由基能力均最好,表示该组分的抗氧化肽的抗氧化特性最好。且组分3的相对分子质量约为695.3。然后再通过G-15进行进一步分离得到两个组分5和6,在通过还原力和DPPH的测定得到组分6的抗氧化效果最好。3.通过小鼠实验我们发现鹅肉抗氧化肽能够有助于减轻炎症反应,抑制血浆IL-6、TNF-α水平的升高。与模型组相比,低肽剂量和高肽剂量分别降低血浆内毒素4.82%和6.08%,降低IL-67.81%和11.52%,降低TNF-α 3.99%和5.3%；同时鹅肉抗氧化肽对于降低PLA2提升肠道中SIgA也有很显著的效果,低肽剂量组合和高肽剂量分别降低了PLA217.04%和29.5%,降低SIgA19.3%和34.6%。4.经SephadexG-15分离后的高活性组分,通过氨基酸分析仪得到15种氨基酸,其中Tyr（33.59%）、Phe（18.25%）、His（7.16%）、Gly（42.74%）占绝大多数。鹅肉抗氧化肽经MALDI SYNAPT QTOF MS质谱分析鉴定抗氧化肽的相对分子质量为238.14 Da,经MassLynx 4.1软件对测定出的质谱进行序列分析,得到的氨基酸序列Gly-Tyr。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 引言
• 1.2 鹅肉简介
• 1.2.1 鹅肉概述
• 1.2.2 鹅肉蛋白的营养价值
• 1.2.3 鹅肉蛋白研究进展
• 1.3 抗氧化肽
• 1.3.1 国内外抗氧化肽的研究进展
• 1.3.2 抗氧化肽的作用机理
• 1.3.3 抗氧化肽的制备方法
• 1.3.4 抗氧化肽的应用现状
• 1.3.4.1 在功能性食品中的应用
• 1.3.4.2 在食品添加剂中的应用
• 1.3.4.3 在化妆品和医药工业中的应用
• 1.4 本课题研究的意义、目的与内容
• 1.4.1 意义和目的
• 1.4.2 本课题的研究内容
• 1.4.3 本课题的创新点
• 第2章 鹅肉蛋白酶解条件优化及酶解产物抗氧化活性研究
• 2.1 材料与仪器
• 2.1.1 试验材料和试剂
• 2.1.2 试验仪器
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 鹅肉的预处理
• 2.2.2 总氮的测定
• 2.2.3 水解度的测定
• 3+还原力的测定方法'>2.2.4 酶解液对Fe³⁺还原力的测定方法
• 2.2.5 酶种的确定
• 2.2.6 最优水解时间的确定
• 2.2.7 最优液固比的确定
• 2.2.8 最优加酶量的确定
• 2.2.9 最优pH的确定
• 2.2.10 最优温度的确定
• 2.2.11 响应曲面法对最佳水解工艺的优化
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 总氮的测定
• 2.3.2 酶种的选择
• 2.3.3 最佳水解时间的确定
• 2.3.4 最佳固液比的确定
• 2.3.5 最佳加酶量的确定
• 2.3.6 最佳pH值的确定
• 2.3.7 最佳温度的确定
• 2.3.8 最佳水解条件的优化
• 2.3.8.1 三因素三水平Box-Behnken组合试验
• 2.3.8.2 回归模型的建立和显著性检验
• 2.3.8.3 水解度的响应面因素分析
• 2.3.5.4 验证性实验
• 2.4 小结
• 第3章 凝胶层析法分离鹅肉蛋白抗氧化肽
• 3.1 材料与仪器
• 3.1.1 实验材料与试剂
• 3.1.2 实验仪器
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 鹅肉粗肽粉的制备
• 3.2.2 凝胶层析法
• 3.2.2.1 凝胶的预处理
• 3.2.2.2 树脂的填充过程
• 3.2.2.3 填充质量的评估
• 3.2.2.4 柱的平衡
• 3.2.3 上样和洗脱
• 3.2.4 SephadexG-25分离条件的优化
• 3.2.4.1 洗脱流速的确定
• 3.2.4.2 上样体积的确定
• 3.2.4.3 上样浓度的确定
• 3.2.5 SephadexG-15分离抗氧化肽
• 3.3 鹅肉抗氧化肽抗氧化特性的测定
• 3.3.1 三价铁离子还原力的测定
• 3.3.2. DPPH自由基清除率的测定
• 3.4 鹅肉抗氧化肽相对分子质量的测定
• 3.5 实验结果与分析
• 3.5.1 SephadexG-25上样体积的确定
• 3.5.2 SephadexG-25上样浓度的确定
• 3.5.3 SephadexG-25洗脱流速的确定
• 3.5.4 SephadexG-25对抗氧化肽的分离
• 3.5.5 SephadexG-15对抗氧化肽的分离
• 3.5.6 鹅肉多肽相对分子质量的测定
• 3.6 小结
• 第4章 鹅肉抗氧化肽对小鼠肠粘膜屏障的保护作用
• 4.1 材料与仪器
• 4.1.1 实验材料与试剂
• 4.1.2 实验仪器
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 实验动物饲养管理
• 4.2.2 实验动物的分组及建立模型
• 4.2.3 检测指标及方法
• 4.2.3.1 血浆内毒素（ET）测定
• 4.2.3.2 白细胞介素-6（1L-6）测定
• 4.2.3.3 血浆TNF-α水平
• 4.2.3.4 小鼠小肠Ⅱ型PLA2含量的测定
• 4.2.3.5 肠道分泌型IgA含量
• 4.2.4 统计分析
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 LPS注射后小鼠的一般情况
• 4.3.2 小鼠血浆内毒素测定结果
• 4.3.3 小鼠血浆IL-6测定结果
• 4.3.4 小鼠血浆TNF-α测定结果
• 2含量测定结果'>4.3.5 小鼠PLA₂含量测定结果
• 4.3.6 小鼠SIgA含量测定结果
• 4.4 小结
• 第5章 液相质谱联用技术对鹅肉抗氧化肽分离和序列分析
• 5.1 材料与仪器
• 5.1.1 实验材料与试剂
• 5.1.2 实验仪器
• 5.2 实验方法
• 5.2.1 鹅肉分离蛋白氨基酸测定及评价
• 5.2.2 UPLC-MS分析抗氧化肽的结构
• 5.3 结果与分析
• 5.3.1 鹅肉多肽氨基酸组分分析结果
• 5.3.2 抗氧化活性肽UPLC的分离
• 5.3.3 鹅肉抗氧化肽结构的质谱鉴定
• 5.4 小结
• 全文结论
• 论文创新点
• 展望
• 参考文献
• 在读期间发表的学术论文及研究成果
• 致谢