论文摘要
目的:研究乳腺癌细胞原代培养的方法,及FCM法和MTT法在筛选敏感抗癌药物中的应用,以探究化疗药物敏感性预测的实现途径。方法:（1）选取经临床病理证实的乳腺癌标本,进行体外细胞原代分离、培养。（2）将培养细胞按每两孔一个处理组随机分7组:对照组和加药处理1、2、3、4、5、6、组。1-6组分别加入终浓度为5PPC的阿霉素（ADM）、甲氨喋呤（MTX）、紫杉醇（TAX）、氟脲嘧啶（5-FU）、丝裂霉素（MMC）和长春新碱（VCR）,对照组加等量培养液。48小时后收集细胞,流式细胞仪测细胞凋亡率。（3）将培养细胞按三孔一个处理组随机分7组:对照组和加药处理1、2、3、4、5、6、组。1-6组分别加入终浓度为5PPC的阿霉素（ADM）、田氨喋呤（MTX）、紫杉醇（TAX）、氟脲嘧啶（5-FU）、丝裂霉素（MMC）和长春新碱（VCR）,对照组加等量培养液。48小时后MTT法测光密度值,计算抑制率。结果:（1）乳腺癌细胞的形态和鉴定:乳腺癌细胞分离培养约2周后呈较稳定地生长增殖状态,癌细胞呈梭形贴壁生长,中间夹杂少量间质细胞呈多角形伸展状生长。苔盼兰染色检测细胞活力达90%以上,免疫细胞化学染色胞膜糖蛋白染色阳性,胞膜呈棕黄色,证实为乳腺癌细胞。浸润性导管癌11例（标本1-11）,浸润性小叶癌13例（标本12-24）,乳头状癌3例（标本25-27）,粘液腺癌2例（标本28-29）。（2）流式细胞仪检测结果:各药物处理组均可见乳腺癌细胞呈不同程度的凋亡。总体上,各加药组与对照组比较差异有显著性,P＜0.05,浸润性导管癌对TAX高敏,ADM、5-FU敏感,MTX、MMC、VCR耐药;浸润性小叶癌对TAX高敏,ADM、VCR敏感,MTX、MMC、5-FU耐约;乳头状癌对TAX高敏,ADM、5-FU敏感,MTX、MMC、VCR耐药;粘液腺癌对ADM、TAX高敏,MMC敏感,MTX、5-FU、VCR耐药。（3）MTT法检测结果:各药物处理组均可见乳腺癌细胞呈不同程度的凋亡。总体上,各加药组与对照组比较差异有显著性,P＜0.05,浸润性导管癌对TAX、ADM、5-FU高敏,MTX、VCR敏感,MMC耐药:浸润性小叶癌对ADM、TAX、5-FU高敏,MTX、MMC、VCR敏感;乳头状癌对ADM、TAX、5-FU高敏,MTX、VCR敏感,MMC耐药;粘液腺癌对ADM、TAX、5-FU高敏,MTX、MMC、VCR敏感。结论:1、不同标本在体外实验中显示了对不同药物的敏感性差异,因此药物敏感性预测是必要的。体外肿瘤药敏实验可以为不同个体选择针对性的个体化化疗药物。2、FCM法在药敏实验中体现了高效、快捷、准确和干扰因素少的优势,但因其需细胞数较大,限制了对一些标本的检测。3、目前,MTT法但仍不失为一种较简便、有效的体外药敏实验方法。