鹿角托盘17KD蛋白的分离纯化及性质研究

论文摘要

目的:比较鹿茸、鹿角托盘和鹿骨水溶性总蛋白的差异,对鹿角托盘中的特异蛋白进行分离纯化,并进一步研究其理化性质及细胞活性。方法:采用中空纤微膜技术分离提取鹿茸、鹿角托盘和鹿骨水溶性总蛋白;应用SDS-PAGE法比较鹿茸、鹿角托盘和鹿骨水溶性总蛋白差异;应用超滤、离子交换层析、凝胶过滤层析等现代生物技术分离、纯化鹿角托盘特异蛋白;应用细胞培养技术、质谱技术等进行性质研究。结果:1、采用中空纤微膜分离技术,鹿茸、鹿角托盘及鹿骨的水溶性总蛋白收率分别为17.1%、8%、0.1%。2、鹿茸、鹿角托盘和鹿骨水溶性总蛋白的差异极其明显,其中鹿角托盘17KD蛋白是鹿角托盘中的特异蛋白。3、首次从鹿角托盘中分离纯化出鹿角托盘17KD蛋白。分离纯化的鹿角托盘17KD蛋白经检测达到电泳和高效液相纯。4、对分离纯化的鹿角托盘17KD蛋白的细胞活性进行了研究,结果表明鹿角托盘17KD蛋白对Vero、L929等细胞增殖有明显的影响。结论:1、鹿茸、鹿角托盘和鹿骨水溶性总蛋白差异明显。因此,SDS-PAGE法是鉴别鹿茸、鹿角托盘和鹿骨粉末的有效,快速,稳定,简便的方法;2、作为鹿角托盘中的特异蛋白,17KD蛋白具有明显的促细胞增值活性,为进一步研究鹿角托盘的药理活性及新药研发奠定了基础。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩略语
• 第一章 绪论
• 1.1 鹿角托盘化学成分的研究
• 1.2 鹿角托盘药理活性的研究
• 1.3 鹿角托盘的临床应用
• 1.4 蛋白质在中药研究开发中的重要地位
• 1.5 本研究的目的与意义
• 第二章 材料与仪器
• 2.1 材料与试剂
• 2.2 仪器
• 2.3 主要试剂配制
• 第三章 实验方法
• 3.1 总蛋白的浸提
• 3.2 中空纤微膜分离技术在鹿茸、鹿角托盘和鹿骨总蛋白分离提取中的应用
• 3.3 蛋白含量测定
• 3.4 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳
• 3.5 鹿角托盘17KD 蛋白的分离纯化工艺路线
• 3.6 鹿角托盘17KD 蛋白性质研究
• 3.7 鹿角托盘 17KD 质谱鉴定
• 3.8 鹿角托盘 17KD 活性研究
• 第四章 实验结果
• 4.1 鹿茸、鹿角托盘和鹿骨水溶性总蛋白差异比较
• 4.2 鹿角托盘17KD 蛋白分离纯化研究
• 4.3 鹿角托盘17KD 蛋白活性研究
• 第五章 讨论
• 5.1 总蛋白的浸提策略
• 5.2 中空纤维膜分离技术在鹿茸、鹿角托盘和鹿骨总蛋白提取分离纯化中的应用
• 5.3 鹿茸、鹿角托盘和鹿骨水溶性总蛋白之比较
• 5.4 鹿角托盘17KD 蛋白纯化及工艺路线的特点
• 5.5 鹿角托盘17KD 蛋白质谱解析
• 5.6 细胞活性检测方法的选择
• 5.7 鹿角托盘17KD 蛋白细胞活性研究
• 第六章 结论与展望
• 6.1 结论
• 6.2 展望
• 致谢
• 参考文献