抗幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori）细菌素的筛选及作用机理研究

论文摘要

幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori,Hp）是一种生长于胃粘膜层的革兰氏阴性细菌,是慢性胃炎、消化性溃疡的主要致病因素,也是胃癌的主要诱发因子。世界卫生组织已将其列为I类致癌因子。目前,对于该疾病的治疗仍然缺乏有效的药物,筛选具有抑制幽门螺旋杆菌的候选化合物,对于开发治疗胃炎等胃肠道疾病药物具有重要意义。本研究在发现产细菌素菌株具有抑制Hp作用的基础上,对其活性成分细菌素进行了以抗Hp为导向的提取、分离与纯化,结构鉴定,含量测定以及体外拮抗Hp活性评价及其抑菌机理等研究,获得如下研究结果:1、从45株产细菌素的菌株中筛选出5株具有抑制Hp的菌株,优选发现菌株编号为PC-5的菌株活性较强,形态特征观察和生理生化鉴定试验结果表明,该菌株为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。2、菌株PC-5产细菌素的最佳种子培养条件:培养基为葡萄糖5g/L、酵母膏10g/L、MgSO4 0.5g/L、pH7.0、培养温度37℃、接种量3%（V/V）、培养时间24h、摇床转数150r/min。最佳发酵培养条件:发酵培养基为葡萄糖5g/L、酵母膏10g/L、MgSO4 0.5g/L、pH7.0、培养温度35℃、接种量4%（V/V）、转数150 r/min,罐压0.06MPa,通气量25L/min。3、采用大孔吸附树脂、有机溶剂萃取和硅胶柱层析等方法,分离得到单体成分A-Ⅲ,经有机波谱分析和理化性质测定,成分A-Ⅲ为2个氨基酸与1个不饱和羟基脂肪酸组成的一种新型环脂肽细菌素。4、建立了反相高效液相色谱法测定发酵液中A-Ⅲ含量的方法,色谱条件为:色谱柱:Hypersil C18柱;（150 mm×4.6 mm,5μm）;检测波长:203nm;流动相:甲醇-水（73:27）;流速:1mL/min;柱温:室温。结果显示,A-Ⅲ在1.44μg～3.24μg范围内线性关系良好,回归方程为Y=2×106X-891076,（r=0.9994）。该方法简便、可靠,适于A-Ⅲ成分的含量测定和质量控制。5、体外拮抗Hp的结果显示,A-Ⅲ能很好的抑制Hp,主要是通过改变细胞形态致使细菌失活。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 英文缩写索引
• 1 前言
• 1.1 拮抗幽门螺旋杆菌药物研究进展
• 1.2 细菌素研究进展
• 1.2.1 细菌素的分类
• 1.2.2 细菌素的研究现状
• 1.2.3 研究内容
• 1.2.4 创新点
• 2 产抗幽门螺旋杆菌细菌素菌株的筛选及种的鉴定
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 试验方法
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 抗幽门螺旋杆菌菌株的初筛
• 2.2.2 抗幽门螺旋杆菌菌株的优选
• 2.2.3 PC-5 的形态特征观察及生理生化鉴定
• 2.3 讨论
• 2.4 本章小结
• 3 PC-5 菌株产抗幽门螺旋杆菌细菌素的发酵条件
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 仪器与设备
• 3.1.3 方法
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 菌株PC-5 产细菌素发酵条件的研究
• 3.2.2 菌株PC-5 产细菌素培养条件的筛选结果
• 3.2.3 中试
• 3.2.4 验证中试最佳条件
• 3.3 讨论
• 3.4 本章小结
• 4 PC-5 产抗幽门螺旋杆菌细菌素的分离纯化及结构鉴定
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 方法
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 细菌素的提取、分离纯化
• 4.2.2 A-Ⅲ的提取、分离纯化工艺流程
• 4.2.3 化合物鉴定
• 4.3 讨论
• 4.4 本章小结
• 5 A-Ⅲ含量测定
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 材料
• 5.1.2 方法
• 5.2 结果与分析
• 5.2.1 HPLC 法测定发酵液中A-Ⅲ的含量
• 5.3 讨论
• 5.4 本章小结
• 6 A-Ⅲ活性评价及作用机理
• 6.1 材料与方法
• 6.1.1 材料
• 6.1.2 方法
• 6.2 结果与分析
• 6.2.1 A-Ⅲ对幽门螺旋杆菌体外拮抗活性
• 6.2.2 对幽门螺旋杆菌细胞膜通透性的影响
• 6.2.3 对幽门螺旋杆菌菌体显微特征的影响
• 6.3 讨论
• 6.4 本章小结
• 全文结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 个人简历、在学期间发表的学术论文及取得的研究成果