论文摘要
目的利用巢式甲基特异性PCR法（nested methylation specific PCR）+ DNA克隆测序及限制性内切酶PCR法（REP-PCR）检测人骨髓瘤（MM） U266细胞系p16基因的甲基化状态;探讨三氧化二砷（As2O3）诱导p16基因去甲基化作用转录调节作用及其可能的机制;比较摸索一种高灵敏度的DNA甲基化检测方法。方法采用巢式甲基特异性PCR法（nested methylation specific PCR）+ DNA克隆测序及限制性内切酶PCR法（REP-PCR）检测U266细胞株P16基因甲基化状态,比较摸索高灵敏度的DNA甲基化检测方法;RT-PCR检测p16、甲基转移酶（DNMT）1、DNMT3A、DNMT3B基因mRNA的表达,生长曲线、MTT法检测As2O3对细胞的生长和增殖抑制。利用流式细胞仪DNA 含量分析法探讨As2O3对骨髓瘤细胞系U266周期的影响。结果（1）未处理组U266细胞基因组DNA 的胞嘧啶保持不变,而经As2O3作用的U266细胞基因组DNA 的胞嘧啶均已变为胸腺嘧啶,说明U266细胞存在p16基因甲基化,As2O3作用72h后p16 基因甲基化程度明显减弱至消失,p16 基因异常甲基化的现象被逆转; （2）未处理组细胞p16基因不表达,As2O3作用72h后p16基因表达增强,0.5umol/L组、1.0umol/L组和2.0umol/L组p16基因表达阳性条带灰度值与β-actin 比值分别为（0.22±0.10）、（0.59±0.11）、（0.68±0.09）,阳性对照灰度比值为（0.77±0.13）,其差异有统计学意义（P<0.01）;（3）与未处理组相比,As2O3作用72h后甲基转移酶（DNMT）1、DNMT3A、DNMT3B 的表达下降并呈浓度依赖性。（4）与对照组相比,3 组不同浓度As2O3均能明显抑制肿瘤细胞生长,G0-G1期细胞增加。结论1、As2O3可能通过抑制甲基转移酶甲基转移酶（DNMT）
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