论文题目: 以过氧化物酶体增殖物受体γ为靶点的天然减肥药物的初步筛选
论文类型: 博士论文
论文专业: 内科内分泌学
作者: 徐剑
导师: 史轶蘩,邓洁英,金自孟,龚凤英
关键词: 启动子,前脂肪细胞,红花,茜草,荷叶
文献来源: 中国协和医科大学
发表年度: 2005
论文摘要: 以过氧化物酶体增殖物受体γ为靶点的天然减肥药物的初步筛选目的： 肥胖症已是危害人类健康的重要疾病，与冠心病、脑卒中、2型糖尿病、高脂血症、呼吸睡眠暂停综合症等疾病的发生有密切的关系。肥胖症形成的核心是前脂肪细胞增殖分化为成熟脂肪细胞和脂肪细胞中脂质的储积。过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPAR γ）是此过程中的关键调节因素。利用细胞转染技术，将含有人PPAR γ2基因启动子的荧光素酶表达质粒稳定转染到小鼠前脂肪细胞（3T3-L1细胞系），以此作为工具，从中草药众多的天然化合物中寻找对人PPAR γ2启动子活性有影响的药物，并通过动物实验观察这些药物对SD大鼠体重及糖脂代谢的影响。 方法： 1．含人PPAR γ2基因启动子序列的荧光素酶表达质粒的克隆和稳定转染3T3-L1细胞株的建立：以含有人PPAR γ2基因启动子（-910～+140bp）的荧光素酶表达质粒（pGL3-PPAR γ21kb-Luc）为模板，克隆人PPAR γ2基因启动子序列（-615bp～+10bp），将其插入到含荧光素酶报告基因的质粒载体pGL3-Basic中，得到含人PPAR γ2基因启动子-615～+10bp序列的荧光素酶表达质粒。再分别将这两段不同长度人PPAR γ2基因启动子序列（1050bp及625bp）插入到含增强子的荧光素酶报告基因的质粒载体pGL3-Enhancer中，得到两个新的含有人PPAR γ2基因启动子及增强子序列的荧光素酶表达质粒。然后把这4个质粒用脂质体转染法，转染到3T3-L1细胞中，经筛选药物Geneticin（G418）筛选，获得表达荧光素酶的稳定转染3T3-L1细胞株。 2．中药水溶性提取物（extracts of Chinese medical herbs，ECMH）对人PPAR γ2基因启动子活性的影响：含有人PPAR γ2基因启动子序列的荧光
论文目录:
英文缩写
中文摘要
英文摘要
前言
实验材料
一、主要试剂
二、主要材料
三、主要仪器设备
四、试剂配制
技术路线
实验方法
一、pGL3-PPARγ_21kb-luc及pcDNA3.1(+)质粒的鉴定及大量提取
二、pGL3-PPARγ_2625bp-luc质粒的构建
三、pGL3-PPARγ_2625bp-enhancer-luc质粒及pGL3-PPARγ_21kb-enhancer-luc质粒的构建
四、稳定转染3T3L1细胞系地建立
五、中药水溶性提取物的制备
六、药物刺激实验
七、药物刺激对人前脂肪细胞PPARγ_2 mRNA表达的影响
八、动物实验
九、数据处理和统计分析
实验结果
一、质粒的克隆与鉴定
二、稳定转染细胞系的建立
三、药物刺激实验
四、红花、荷叶、茜草ECMH对人前脂肪细胞PPARγ_2 mRNA表达的影响
五、动物实验结果
讨论
一、选基因的确定
二、稳定转染细胞株的建立及药物筛选
三、茜草、荷叶对SD大鼠体重及糖、脂代谢的影响
参考文献
论文综述
致谢
发布时间: 2006-10-13
参考文献
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