芽孢杆菌对草鱼表观消化率、消化酶活性及组成的影响

论文摘要

本文研究了饲料中添加不同水平芽孢杆菌（Bacillus spp.）对草鱼（Ctenopharyngodon idellus）表观消化率、肠道与肝胰脏消化酶活性及蛋白酶组成的影响。试验鱼共分为4组。对照组（Ⅰ）投喂基础日粮,试验组（Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）在基础日粮的基础上分别添加1×108CFU/g、3x108CFU/g、5×108CFU/g芽孢杆菌,饲喂60d,主要研究结果如下：1.持续投喂30d后,开始收集粪便测定各营养物质的表观消化率。与对照组相比,Ⅱ组的干物质、粗蛋白、粗脂肪和粗灰分表观消化率,Ⅲ组干物质、粗蛋白、粗脂肪表观消化率和Ⅳ组粗蛋白、粗脂肪表观消化率均显著提高（P<0.05）,其中Ⅱ组的表观消化率最高。芽孢杆菌添加量与营养物质表观消化率最符合一元二次曲线方程,随着芽孢杆菌添加量的增加,草鱼对营养物质的表观消化率呈现先上升后下降的趋势。经拟合的曲线计算,草鱼对干物质、粗蛋白、粗脂肪和粗灰分表观消化率达到最佳效果的芽孢杆菌添加量分别为2.39×108CFU/g、1.69×108CFU/g、2.38×10OCFU/g、1.56×108CFU/g。2.持续投喂30d后,Ⅱ组中肠和Ⅱ、Ⅲ组肝胰脏蛋白酶活性均显著高于对照组（P<0.05）；Ⅱ组前肠和后肠淀粉酶活性显著高于对照组（P<0.05）；Ⅱ、Ⅲ组后肠脂肪酶活性均显著高于对照组（P<0.05）,持续投喂60d后,也有相似的结果。表明日粮中添加芽孢杆菌后草鱼前肠淀粉酶、草鱼中肠3种消化酶活性、后肠淀粉酶和脂肪酶以及肝胰脏蛋白酶活性显著升高（P<0.05）；添加1-3×108CFU/g芽孢杆菌草鱼肠道和肝胰脏消化酶活性可达最高,而添加5×108CFU/g芽孢杆菌草鱼肠道和肝胰脏消化酶活性则下降,表明消化酶活性随芽孢杆菌添加量的增加上升到一定程度时,便维持在一定水平或下降,而随着投喂时间的延长,消化酶活性也不会持续升高,反而会有所下降。双因子方差分析表明,芽孢杆菌的添加量对中肠、后肠和肝胰脏蛋白酶活性,前肠、中肠和后肠淀粉酶活性,中肠和后肠脂肪酶活性均有显著影响（P<0.05）；投喂时间对肝胰脏蛋白酶活性和淀粉酶活性有显著影响（P<0.05）3.持续投喂60d后,利用SDS-底物-PAGE电泳技术鉴定芽孢杆菌对草鱼消化器官蛋白酶组成和相对含量的影响。与对照组相比,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组后肠蛋白酶组成增加了HP2和HP4两种,分子量分别为24.9KDa、27.8KDa,酶带HP5-HP9的相对含量比对照组有明显的增加；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组中肠蛋白酶组成增加了MP5一种,分子量为32.4KDa,酶带MP2、MP4、MP6的相对含量比对照组有明显的增加；前肠与肝胰脏蛋白酶的组成无变化,但Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组前肠蛋白酶酶带FP2、FP4-FP7的相对含量比对照组有明显的增加,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组肝胰脏蛋白酶酶带LP7的相对含量比对照组有明显的增加,而酶带LP6、LP5和LP3的相对含量比对照组有明显的减少。这一结果表明在饲料中添加芽孢杆菌促进草鱼消化蛋白酶活性上升的机理主要在于芽孢杆菌促进了宿主消化酶的分泌,而芽孢杆菌分泌的胞外蛋白酶则不是主要部分。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 综述
• 1.1 芽孢杆菌概述
• 1.2 芽孢杆菌的作用机制及其在水产养殖中的作用
• 1.2.1 提高生长性能
• 1.2.2 分泌多种胞外酶,提高消化酶活性
• 1.2.3 促进动物非特异性免疫机能,减少病害发生
• 1.2.4 竞争排斥病原微生物,维持和恢复肠道微生态平衡
• 1.2.5 净化养殖水体环境
• 1.2.6 与其它添加剂的联合使用
• 1.3 芽孢杆菌制剂研发和应用中存在的问题
• 1.3.1 菌种的筛选
• 1.3.2 菌种的安全性
• 1.3.3 使用时间
• 1.3.4 使用方式及剂量
• 1.3.5 产品的保存
• 1.4 本研究的意义
• 第二章 芽孢杆菌对草鱼表观消化率和消化酶活性的影响
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 试验鱼
• 2.1.2 试验菌种
• 2.1.3 试验日粮
• 2.1.5 表观消化率测定
• 2.1.6 消化酶活性测定
• 2.1.6.1 采集样品
• 2.1.6.2 制备酶液
• 2.1.6.3 蛋白酶活性测定
• 2.1.6.4 淀粉酶活性测定
• 2.1.6.5 脂肪酶活性测定
• 2.1.7 数据统计与分析
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 芽孢杆菌对草鱼营养物质表观消化率的影响
• 2.2.2 芽孢杆菌对草鱼蛋白酶活性的影响
• 2.2.3 芽孢杆菌对草鱼淀粉酶活性的影响
• 2.2.4 芽孢杆菌对草鱼脂肪酶活性的影响
• 2.3 讨论
• 2.3.1 芽孢杆菌对草鱼营养物质表观消化率的影响
• 2.3.2 芽孢杆菌对草鱼消化酶活性的影响
• 第三章 芽孢杆菌对草鱼消化系统蛋白酶组成和相对活性的影响
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 试验鱼
• 3.1.2 试验菌种
• 3.1.3 试验日粮
• 3.1.4 饲养管理
• 3.1.5 测定方法
• 3.1.5.1 蛋白酶提取
• 3.1.5.2 凝胶配制
• 3.1.5.3 点样
• 3.1.5.4 电泳
• 3.1.5.5 胶片处理
• 3.1.5.6 酶带分子量的计算
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 芽孢杆菌对草鱼前肠蛋白酶的影响
• 3.2.2 芽孢杆菌对草鱼中肠蛋白酶的影响
• 3.2.3 芽孢杆菌对草鱼后肠蛋白酶的影响
• 3.2.4 芽孢杆菌对草鱼肝胰脏蛋白酶的影响
• 3.3 讨论
• 参考文献
• 硕士期间发表的文章
• 致谢