内皮抑素基因腺病毒载体表达系统治疗小鼠黑色素瘤的实验研究

论文题目: 内皮抑素基因腺病毒载体表达系统治疗小鼠黑色素瘤的实验研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 皮肤病与性病学

作者: 曹瑞华

导师: 廖万清,温海

关键词: 内皮抑素,腺病毒载体,基因治疗,血管生成,黑色素瘤

文献来源: 第二军医大学

发表年度: 2005

论文摘要: 目的:检测内皮抑素基因腺病毒载体表达系统（Ad-mES）体外生物学活性及其治疗小鼠黑色素瘤的效果;初步探讨内皮抑素的抗肿瘤机理。方法:在HEK293细胞内扩增腺病毒,50%组织培养感染剂量法测定其滴度;RT-PCR、Western Blot和ELISA法检测目的基因的表达;MTT法和流式细胞术检测靶细胞的体外生长情况。多因素多水平析因分析法设计测定体内转染率;观察各组小鼠肿瘤的生长、转移和生存率,Western Blot、免疫组化和透射电镜等鉴定组织内目的基因的表达、血管生成和靶细胞的生长。结果:腺病毒的滴度为1010pfu/ml,靶细胞明确表达内皮抑素基因,Ad-mES抑制内皮细胞的增殖;治疗小鼠黑色素瘤时,取瘤内注射和间隔7天给药Ad的体内转染率最高（MOI=500时,37.33%）。治疗组小鼠平均生存时间延长,肿瘤体积增长减慢,肿瘤新生血管生成减少。结论:Ad-mES对小鼠黑色素瘤有较好的治疗效果。

论文目录:

英文缩略词表

中文摘要

英文摘要

前言

第一部分内皮抑素基因腺病毒载体表达系统体外对靶细胞的影响

一、腺病毒的扩增、纯化、浓缩和病毒滴度测定

二、B16F10黑色素瘤细胞和ECV304内皮细胞的培养

三、Ad-mES对B16F10和ECV304细胞的体外转染效率测定

四、检测靶细胞内mES的表达

1.检测B16F10和ECV304细胞的内皮抑素基因mRNA表达

2.检测B16F10和ECV304细胞的内皮抑素蛋白的表达

3.检测B16F10和ECV304细胞上清中内皮抑素蛋白的表达量

五、Ad-mES对靶细胞生物活性的影响

1.对B16F10、ECV304细胞增殖的影响

2.对B16F10、ECV304细胞凋亡的影响

六、讨论

第二部分内皮抑素基因腺病毒载体表达系统体内对黑色素瘤的影响

一、腺病毒基因治疗小鼠黑色素瘤的体内转染率测定

材料和方法

结果

讨论

二、内皮抑素基因腺病毒载体表达系统对黑色素瘤作用的实验研究

(一) Ad-mES对小鼠黑色素瘤生成影响的实验研究

材料和方法

结果

(二) Ad-mES基因治疗小鼠黑色素瘤的实验研究

材料和方法

结果

(三) 讨论

参考文献

第三部分全文总结

致谢

综述

发布时间: 2006-05-08

参考文献

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内皮抑素基因腺病毒载体表达系统治疗小鼠黑色素瘤的实验研究

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