论文摘要
嗜酸乳杆菌是人类和动物肠道菌群的主要成员,是一种重要的益生菌。粘附是细菌在肠道内定植的第一步,嗜酸乳杆菌表层蛋白介导菌体在肠道上皮细胞表面的粘附,促进了菌体定植在肠道内并进而对宿主产生一系列的益生作用。对嗜酸乳杆菌表层蛋白与肠粘液的相互作用的研究有利于阐述益生菌的粘附机理,对益生菌的应用具有重要的理论意义。分别用酸性5mol/L LiCl法,中性5mol/L LiCl法和8mol/L尿素法提取嗜酸乳杆菌的表面蛋白,并结合LiCl处理的温度和时间等条件因素,用Gel-pro软件进行分析选取最优的提取方法,并分析了提取工艺的最佳温度和时间,得出酸性5mol/L LiCl 25℃处理15分钟提取的嗜酸乳杆菌表面蛋白浓度和纯度最佳,可用于后续的工作。无菌条件下将鲤鱼、草鸡、新西兰兔、昆明鼠的肠道取出,用无菌的PBS缓冲液（pH 9.5）冲洗后轻轻刮取粘液,离心收集的上清液即为动物的肠粘液。酸性Licl法处理菌体后,收集的上清液即为菌体的表面蛋白。分别将动物肠粘液蛋白与表面蛋白用酯化生物素（B-NHS）标记进行蛋白印迹试验, DAB显色得到以下结果:在Western-blot鉴定嗜酸乳杆菌表面蛋白中与鲤鱼、草鸡、新西兰兔、昆明鼠的肠粘液相互作用的蛋白,表明S层蛋白对菌体粘附在肠道内起着重要的作用。嗜酸乳杆菌中的S层蛋白分子量43.6kDa,即SA蛋白,可以与多种动物（鲤鱼,草鸡,新西兰兔,昆明鼠）肠粘液蛋白形成作用关系。相似地,用Western-blot法可以鉴定出可能与S层蛋白作用的鲤鱼、草鸡、新西兰兔、昆明鼠的肠粘液蛋白,即新西兰兔肠粘液中分子量为35kDa的蛋白和昆明鼠肠粘液中分子量为55kDa的蛋白。它们是S层蛋白的受体,在菌体粘附过程中起重要作用。然而,实验结果表明,在鲤鱼与草鸡肠粘液蛋白在嗜酸乳杆菌的粘附中显示条带较多,特异性较差,表明嗜酸乳杆菌与鲤鱼和草鸡肠道粘液蛋白不存在特异的相互作用。总之,在嗜酸乳杆菌表面蛋白与动物肠道粘液蛋白相互作用过程中,菌体表面起主要作用的是蛋白SA,而肠道粘液中起主要作用的蛋白则是依物种的变化而变化的,动物的进化程度越高,蛋白条带越来越单一,即特异性增强。