论文摘要
目的肺纤维化（pulmonary fibrosis,PF）是指由多种病因引起的具有相似病理过程的一类弥漫性肺间质疾病,其病理特征是早期有肺泡结构破坏和弥漫性肺泡炎,继后出现细胞外基质过度沉积,并逐渐演变为弥漫性肺间质纤维化,从而造成肺功能障碍,病人多死于进行性加重的肺纤维化所致的呼吸衰竭。由于发病率逐年增加,发病机制尚未完全明了,缺乏有效的治疗药物,死亡率高。传统的糖皮质激素和细胞毒药物疗效不能令人满意。故寻找行之有效的治疗药物是目前医疗界迫切需要解决的问题。最近研究表明,姜黄素具有广泛的药理作用,如抗炎、抗氧化、抗缺血、抗癌和抗肝纤维化等。为了探讨姜黄素对人胚肺成纤维细纤维化的防治作用,本实验采用转化转化生长因子诱导的人胚肺成纤维细胞作为纤维化模型,从细胞与分子水平研究其防治肺纤维化的疗效和作用机制,为临床治疗提供实验基础。方法以人胚肺成纤维细胞MRC-5为研究对象,用MTT法测定细胞的增殖曲线。不同浓度的姜黄素作用48h后,测定姜黄素对细胞细胞增殖的影响。天狼星红染色后检测吸光度的方法确定姜黄素对细胞胶原合成量的影响。细胞分组:正常组:细胞使用MEM/NEAA培养基加10%FBS（Hyclone）;TGF-β1组:正常培养的以人胚肺成纤维细胞经TGF-β1（5ng/ml）刺激;TGF-β1+姜黄素组:正常培养的以人胚肺成纤维细胞经TGF-β1与姜黄素共同作用48小时,以上各组人胚肺成纤维细胞,经过48小时的不同干预后;分别采用用real time—PCR与RT-PCR法法检测TGF-BⅠ,Ⅱ型受体mRNA以及Smad 3,4,7mRNA的变化。结果正常培养人胚肺成纤维细胞上述因子mRNA均有表达,在培养液中加入TGF-β48小时后,可见MRC-5细胞的Ⅰ型Ⅱ型TGF-β受体的表达增强。加入姜黄素到培养液中,可见明显的抑制作用。抑制了TGF-β诱导的TGF-β受体表达增强的效应。其表达抑制作用明显。TGF-β+姜黄素组与正常组、TGF-β组相比,TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、mRNA表达明显减弱。正常培养人胚肺成纤维细胞上述因子SMAD 3,4,7mRNA均有表达,在培养液中加入姜黄素48小时后,可见MRC-5细胞的SMAD7表达增强,SMAD3;SMAD 4表达减弱。姜黄素加入到TGF-β组培养液中,可见类似的促进SMAD7与抑制SMAD3,4作用,表达促进与抑制作用明显。TGF-β组与正常组、TGF-β+姜黄素组、正常+姜黄素组相比,SMAD3,SMAD4,基因表达明显减弱,而SMAD7表达明显增强结论姜黄素可抑制人胚肺成纤维细胞的胶原分泌,其作用机制可能是通过抑制TGF-βRⅠ,TGF-βRⅡ与SMAD3,4的表达,促进SMAD7的表达来实现。
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标签：人胚肺成纤维细胞论文; 肺纤维化论文; 姜黄素论文; 细胞外基质论文; 转化生长因子受体论文;