论文摘要
第一部分体外实验：低氧诱导因子信号转导通路小分子抑制剂KCN1在恶性黑色素瘤细胞中的作用目的研究在低氧诱导因子信号转导通路小分子抑制剂KCN1作用下,低氧诱导因子HIF-1α、血管内皮生长因子VEGF和碳酸酐酶CA9在小鼠B16LS9及人Mel270黑色素瘤细胞系中表达的改变,探讨KCN1作为眼内黑色素瘤治疗的可能性。方法应用双萤光素酶报告基因检测系统、RT-PCR、Western blot及ELISA方法,对经KCN1处理缺氧条件下培养的人恶性黑色素瘤Mel270细胞和小鼠黑色素瘤B16LS9细胞中HIF-1α、VEGF-A、CA9、GLUT-1进行检测,并且以常氧条件下培养的上述细胞系作对照,观察KCN1对黑色素瘤细胞HIF-1及其下游基因表达的影响。结果在缺氧培养条件下,黑色素瘤细胞系HIF-1α、CA9、VEGF、GLUT-1的表达明显高于在常氧培养条件下的表达,而应用小分子低氧诱导因子信号转导通路抑制剂KCN1有效降低CA9和VEGF的表达。结论①在低氧状态下人和小鼠恶性黑色素瘤细胞中HIF-1α均呈高表达,HIF-1信号转导通路可能成为黑色素瘤靶向治疗的理想位点。②KCN1能影响其下游基因VEGF和CA9的表达。第二部分体内实验：低氧诱导因子信号转导通路小分子抑制剂KCN1在小鼠眼内黑色素瘤模型中的作用目的通过建立体内肿瘤模型,进一步探讨低氧诱导因子信号转导通路小分子抑制剂KCN1对小鼠原发眼内黑色素瘤及其肝脏微转移瘤靶向治疗的有效性。方法①将黑色素瘤细胞注入小鼠脉络膜上腔建立种植肿瘤模型,按组别于不同时间接受不同剂量的KCN1治疗,1周后观察眼内肿瘤成瘤大小,4周后观察肝脏微转移瘤数量。②接种肿瘤细胞后,每隔1周取小鼠血液样本,采用ELISA方法检测血清VEGF表达。③将肿瘤眼、肝脏标本制成石蜡块,采用免疫荧光法检测VEGF、CA9、Ki-67的表达情况及微血管密度。④取小鼠心脏、肺、肾、脾、胃肠道标本制成石蜡块,病理切片观察药物对小鼠主要脏器影响。结果①体内实验证明,KCN1组眼内原发肿瘤生长速度减慢,肝脏微转移瘤数量也明显减少（P<0.01）。KCN1较大剂量、早期用药作用最明显,且该作用一直持续维持至实验结束。②KCN1组小鼠血清VEGF含量明显低于对照组（P<0.01）。③KCN1组VEGF、CA9、Ki67表达及肿瘤微血管密度明显低于对照组（P<0.01）。④实验中未见药物明显副作用。结论①KCN1通过阻断低氧诱导因子信号转导通路,影响VEGF、CA9的表达,在小鼠眼内黑色素瘤模型中显著抑制恶性黑色素瘤生长。②低氧诱导因子信号转导通路小分子抑制剂KCN1减缓恶性黑色素瘤生长,可能与抑制肿瘤增殖及血管生成有关。
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