辛伐他汀对高糖诱导的血管内皮细胞增殖及凋亡的影响及作用机制

论文摘要

目的观察不同浓度辛伐他汀（Simvastatin，SIM）对高糖诱导的血管内皮细胞（vascular endothelial cell，VEC）增殖以及分泌一氧化氮（nitric oxide，NO）、内皮素-1（endothelin-1，ET-1）的影响；了解不同浓度SIM对高糖诱导VEC中活性氧（reactive oxygen species，ROS）含量、细胞凋亡率以及c-Jun氨基末端激酶（c-JunN–terminal kinase，JNK）磷酸化水平的影响，初步探讨SIM保护VEC的作用机制。方法体外完全DMEM培养基培养VEC，将处于对数生长期的VEC随机分为5组，A组：正常对照组（Glu5.5mmol/L）；B组：高糖组（Glu33mmol/L）；C组：高糖+低浓度SIM组（1×10-7mmol/L）；D组：高糖+中浓度SIM组（1×10-6mmol/L）；E组：高糖+高浓度SIM组（1×10-5mmol/L）。①四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度SIM及不同作用时间点6h，12h，18h，24h时VEC增殖的变化，以确定SIM最佳保护时间。②分别用硝酸还原酶法和放射免疫法检测各组细胞上清液中NO和ET-1的水平；③用双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄（2，7-dichlorodmy-drofluorescein diacetate，DCFH-DA）检测各组细胞ROS的水平；④用Annexin V/PI双染法检测各组细胞的凋亡率；⑤增加F组即高糖+SP600125组（SP60012510.0μmol/L），Western-Blot检测各组细胞JNK、p-JNK蛋白表达。结果①与B组相比，SIM可显著改善高糖对VEC增殖的抑制（P<0.01），且呈浓度依赖性；SIM在作用18h时对VEC增殖的改善最为显著（P<0.01）。②与A组相比，高糖组VEC上清中NO水平明显下降，ET-1水平明显上升（P<0.01）；与B组相比，SIM能明显升高NO水平，明显降低上清中ET-1水平，且呈浓度依赖性（P<0.05）。③与A组相比，高糖组VEC的ROS含量明显升高（P<0.01）；与B组相比，SIM组ROS含量呈浓度依赖性下降（P<0.05）。④与A组相比，高糖组VEC的凋亡率明显增加（P<0.01），与B组相比，SIM组细胞凋亡率呈浓度依赖性下降，其中中、高浓度SIM组细胞凋亡率明显下降（P<0.05）。⑤与A组相比，高糖组细胞JNK磷酸化水平明显上升（P<0.01）；与B组相比，SIM能显著降低高糖组JNK的磷酸化水平，且呈浓度依赖性（P<0.05）；与B组相比，SP600125预处理的高糖组JNK磷酸化水平明显下降（P<0.05）。结论高糖明显抑制VEC的增殖，减少NO分泌，增加ET-1分泌和细胞内ROS的生成，促进细胞凋亡，增加JNK的磷酸化水平；SIM可明显改善上述各指标，且有一定的浓度依赖性；JNK抑制剂SP600125预处理后，VEC的p-JNK表达显著减少；SIM可能是通过抑制JNK的磷酸化水平，阻断JNK通路的激活，从而达到保护血管内皮细胞的作用。

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 1. 前言
• 2. 材料与方法
• 3. 结果
• 4. 讨论
• 5. 结论
• 参考文献
• 附录一：个人简历
• 附录二：致谢
• 综述：氧化应激激活 JNK 通路与糖尿病血管并发症
• 参考文献