论文摘要
目的:通过将已构建成功的针对CDK2基因的siRNA真核表达载体,转染至人肝癌细胞株SMMC7721中,研究其对细胞周期调控网络中相关基因CyclinE表达的影响,以及中药树舌多糖GF对其的协同作用。方法:将构建针成功的针对CDK2基因的siRNA真核表达载体通过阳离子脂质体试剂法转染肝癌细胞株SMMC7721,利用实时荧光定量PCR技术研究RNAi抑制CDK2基因后对细胞周期调控网络中相关基因CyclinE的mRNA水平的影响;MTT法检测树舌多糖GF体外对SMMC7721细胞增殖抑制情况并筛选出体外抗瘤的有效树舌多糖GF剂量;并采用荧光定量PCR技术研究树舌多糖对肝癌SMMC7721细胞中CyclinE基因表达的影响并探讨该多糖对其的协同作用。结果:1.树舌多糖GF2.5μg·mL-1、5μg·mL-1、10μg·mL-1对肝癌细胞增殖有明显抑制作用,抑制率分别为20.01%、20.47%、24.44%。2.树舌多糖GF2.5μg·mL-1、10μg·mL-1可使CyclinE基因mRNA表达水平下调。与SMMC7721相比,树舌多糖GF2.5μg·mL-1组与树舌多糖GF10μg·mL-1组CyclinE基因mRNA水平分别下调74%、68%。3.RNAi抑制CDK2基因表达后对CyclinE基因mRNA表达有影响,siRNA190组中CyclinE基因下调20%;siRNA191组中CyclinE基因的mRNA表达下调36%。4.与单纯siRNA190组相比,树舌多糖GF10μg·mL-1+siRNA190组可使CyclinE基因的mRNA水平比单纯siRNA190片段组下调提高5%;与单纯siRNA191组相比,树舌多糖GF2.5μg·mL-1、10μg·mL-1与siRNA191组合用均未能使肝癌细胞中CyclinE基因mRNA水平下调。结论:1.肝癌SMMC7721细胞的过度增殖与CyclinE基因过度表达关系密切。2.树舌多糖GF对体外肝癌细胞株SMMC7721的增殖有明显抑制作用,其机制可能是通过下调CyclinE基因表达实现的。3.肝癌细胞中CyclinE基因的mRNA表达对CDK2的表达有明显的关联性,RNAi特异地沉寂肝癌细胞中CDK2基因后,CyelinE基因表达下调。4.树舌多糖GF对RNAi技术特异沉寂肝癌细胞CDK2基因表达后下调CyclinE基因表达有一定的协同作用,表明树舌多糖GF可能成为肝癌基因治疗中的一个新型辅助药物。
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