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转染BRMS1基因对胃癌SGC7901细胞增殖及体外侵袭力的影响

2020-12-03阅读(111)

转染BRMS1基因对胃癌SGC7901细胞增殖及体外侵袭力的影响

论文摘要

目的:将真核表达载体pcDNA3.1（-）B/myc -BRMS1转染入胃癌SGC7901细胞,观察BRMS1基因在体外对SGC7901细胞增殖及侵袭转移能力的影响。方法:常规培养胃癌SGC7901细胞,用RT-PCR方法检测胃癌SGC7901细胞中BRMS1 mRNA表达情况;用脂质体LIPOFECTAMINE 2000将pcDNA3.1/myc-his（-）B和pcDNA3.1/myc-BRMS1转染入胃癌SGC7901细胞,转染后48小时用300ug/ml的G418加压筛选28天,待抗性克隆形成后用96孔细胞培养板采用有限稀释法挑取单克隆,将单克隆用170ug/ml的G418维持筛选并扩增培养;扩增培养后用RT-PCR和Western Blot方法比较转染前后BRMS1基因的表达变化,取转染后BRMS1基因表达变化最明显的细胞克隆用MTT法绘制细胞生长曲线、用改良Boyden小室法行体外细胞侵袭转移实验。结果:胃癌SGC7901细胞中无BRMS1基因表达;转染真核表达载体pcDNA3.1（-）B/myc-BRMS1组获得3个单克隆,分别命名为SGC7901-R1、SGC7901-R2、SGC7901-R3;转染空质粒载体pcDNA3.1/myc -his（-）B组获得2个单克隆,分别命名为SGC7901-V1、SGC7901-V2;用RT-PCR检测转染后BRMS1基因mRNA表达变化,见转染真核表达载体的3个单克隆中仅SGC7901-R3有BRMS1基因表达,转染空质粒组的2个单克隆均无BRMS1基因表达;将SGC7901、SGC7901-V1、SGC7901-R3细胞分别用MTT法绘制细胞生长曲线,结果表明:BRMS1基因不影响胃癌SGC7901细胞的增殖能力;用改良Boyden小室法行体外细胞侵袭转移实验,结果显示:SGC7901-R3组较SGC7901-V1组侵袭细胞数量明显减少,结果有显著性差异（P﹤0.05）;SGC7901-V1组与SGC7901组相比,侵袭细胞数量无明显减少,统计结果无显著性差异（P﹥0.05）。结论:BRMS1基因在体外可抑制胃癌SGC7901细胞的侵袭能力,但并不影响其增殖能力。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 第1章 引言
  • 第2章 材料和方法
  • 2.1 实验材料
  • 2.1.1 细胞株、质粒来源
  • 2.1.2 主要试剂和产地
  • 2.1.3 主要仪器设备和产地
  • 2.1.4 自配试剂
  • 2.2 实验方法
  • 2.2.1 SGC7901 细胞的培养
  • 2.2.2 RT-PCR 检测转染前后 SGC7901 细胞中 BRM51 的表达变化
  • 2.2.3 真核表达载体及空质粒转染人 SGC7901 细胞
  • 2.2.4 RT-PCR 检测转染后SGC7901 细胞中 BRM51 基因的表达
  • 2.2.5 免疫印迹检测 BRM51 蛋白表达
  • 2.2.6 MTT 法绘制细胞生长曲线
  • 2.2.7 Transwell 膜行体外细胞侵袭实验
  • 2.3 统计学处理
  • 第3章 结果
  • 3.1 总 RNA 提取样品的纯度和质量
  • 3.2 RT-PCR 检测转染前 SGC7901 细胞中 BRM51 mRNA 表达
  • 3.3 核酸定量分析仪测定质粒 DNA 浓度
  • 3.4 确定 G418 最佳筛选浓度
  • 3.5 G418 筛选稳定表达细胞系
  • 3.6 有限稀释法挑取单克隆
  • 3.7 倒置相差显微镜下观察转染并加压筛选过程中细胞的大体形态变化
  • 3.8 转染后 SGC-7901 细胞中 BRM51 mRNA 表达变化
  • 3.9 BRM51 蛋白表达的免疫印迹检测
  • 3.10 倒置相差显微镜下观察转染成功后细胞的大体形态变化
  • 3.11 MTT 法绘制转染前后细胞生长曲线
  • 3.12 胃癌SGC-7901细胞体外侵袭力的变化
  • 第4章 讨论
  • 第5章 结论
  • 致谢
  • 参考文献
  • 附图
  • 综述
  • 攻读学位期间的研究成果

    • 相关论文文献

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