中药总黄酮成分及其复方的体外抗病毒作用观察

论文摘要

通过体外试验的方法初步筛选出抗新城疫病毒效果较好的中药总黄酮成分,在此基础上进一步将所筛选的单味总黄酮成分进行组方,研究总黄酮复方抗新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞的作用,以筛选出抗新城疫病毒效果较好的复方,为临床应用及新药开发奠定理论基础,本研究具体分以下几个部分：试验Ⅰ中药总黄酮成分提取及其在鸡胚成纤维细胞上最大安全浓度的测定采用乙醇液回流结合酸碱沉淀法分别提取了三七、黄芩、粉葛根、半枝莲、忍冬藤、菟丝子、骨碎补、野菊花、一枝黄花等9种中药中的总黄酮。然后采用MTT法测定了10种中药总黄酮成分（淫羊藿总黄酮为实验室保存）在鸡胚成纤维细胞中的安全浓度。结果表明：在所提取的9种中药总黄酮中,黄芩总黄酮的提取率最高,分别达到8.40%；忍冬藤总黄酮的提取率为最低。三七总黄酮在CEF上的最大安全浓度为31.3μg·mL-1,黄芩总黄酮、粉葛根总黄酮、半枝莲总黄酮、菟丝子总黄酮、野菊花总黄酮、一枝黄花总黄酮、淫羊藿总黄酮成分最大安全浓度为62.5μg·mL-1,忍冬藤总黄酮和骨碎补总黄酮成分在浓度为125μg.mL-1时对体外培养的鸡胚成纤维细胞是安全的,且各中药总黄酮成分在安全浓度范围内均有一定的促进细胞增殖或延长细胞存活时间的作用。试验Ⅱ十种中药总黄酮成分对NDV感染CEF的影响为筛选出抗病毒效果较好的总黄酮成分,本试验将10种中药总黄酮成分从CEF安全浓度起各倍比稀释成5个浓度,以先加中药后接种病毒、先接种病毒后加中药和药物与病毒同时加入（既病毒和药物同时）3种加药方式加入到CEF单层中,以MTT法测定了各中药总黄酮成分对NDV感染CEF的影响。结果表明：各总黄酮成分均表现出不同程度的抗病毒活性。其中淫羊藿总黄酮在先加药物、先加病毒2种方式中浓度为31.3-15.6μg·mL-1、病毒和药物同时加入且浓度为31.3μg·mL-1时,黄芩总黄酮在先加病毒方式中浓度为7.8-3.9μg·mL-1时,野菊花总黄酮在先加药物方式中浓度为62.5-31.3μg·mL-1和病毒和药物同时加入方式中浓度为3.9μg·mL-1时,其As70值均显著大于病毒对照与细胞对照,表明这些药物总黄酮成分具有较好的体外抗病毒效果。综合考虑3种加药方式及黄酮提取率等因素,初步筛选出淫羊藿总黄酮、黄芩总黄酮、野菊花总黄酮、三七总黄酮4种中药总黄酮作为抗病毒中药黄酮成分复方的主要组方药物。试验Ⅲ中药总黄酮成分复方对NDV感染CEF的影响为筛选出体外抗病毒效果较好的中药总黄酮成分复方,本试验以上一章筛选出的抗病毒效果较好的淫羊藿总黄酮、黄芩总黄酮、野菊花总黄酮、三七总黄酮4个单味总黄酮成分进行组方,得到9个中药总黄酮成分复方,分别从安全浓度起倍比稀释5个浓度后,以3种加药方式加入到CEF单层细胞中,通过MTT法观察了9个总黄酮成分复方对NDV感染CEF单层细胞的影响。结果显示,各复方在3种加药方式中均表现一定的抗病毒活性,以A570值和最高病毒抑制率进行综合评价,发现淫黄、淫野黄、淫三野黄3个复方的抗病毒效果最好,其次为淫野三。

论文目录

• 目录
• 摘要
• ABSTRACT
• 符号及縮略语
• 第一章 中药抗病毒研究进展
• 1 中药抗病毒病的原则
• 1.1 “扶正”
• 1.2 “祛邪”
• 2 中药抗病毒途径
• 2.1 直接抗病毒作用
• 2.2 间接抗病毒作用
• 2.3 同时具有直接、间接抗病毒作用
• 3 单味中药抗病毒的作用研究现状
• 4 复方中药抗病毒的作用研究现状
• 参考文献
• 第二章 黄酮类化合物生物活性研究进展及本试验的目的意义
• 1 黄酮类化合物结构及其理化特性
• 2 黄酮类化合物的生物活性
• 2.1 黄酮类抗氧化、抗衰老作用
• 2.2 黄酮类抗癌抗肿瘤作用
• 2.3 黄酮类抗菌抗病毒作用
• 2.4 黄酮类免疫调节作用
• 2.5 黄酮类对心血管系统保护作用
• 2.6 黄酮类激素样作用
• 2.7 黄酮类其他作用
• 2.8 本研究的目的意义
• 参考文献
• 第三章 中药总黄酮成分的提取及其在鸡胚成纤维细胞上最大安全浓度的测定
• 摘要
• 1 材料与方法
• 1.1 试验药物及材料准备
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器
• 1.4 中药总黄酮的提取
• 1.5 中药总黄酮的鸡胚成纤维细胞最大安全浓度的测定方法
• 1.6 数据分析
• 2 结果与分析
• 2.1 各中药总黄酮的提取率
• 2.2 中药总黄酮在CEF上的最大安全浓度测定结果
• 3 讨论
• 3.1 中药总黄酮的提取方法
• 3.2 中药总黄酮成分的最大安全浓度
• 参考文献
• ABSTRACT
• 第四章 十种中药总黄酮成分对NDV感染CEF的影响
• 摘要
• 1 材料与方法
• 1.1 试验药物及材料准备
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器
• 1.4 试验方法
• 1.5 数据分析
• 2 结果与分析
• 2.1 不同药物同种加药方式时对NDV感染CEF的影响
• 2.2 同种药物不同加药方式之间抵抗NDV增殖的作用效果
• 3 讨论
• 3.1 各中药总黄酮成分具有不同程度的抗病毒作用
• 3.2 抗病毒中药总黄酮成分的初步确定
• 3.3 抗病毒试验的测定方法与判定标准
• 参考文献
• ABSTRACT
• 第五章 中药总黄酮成分复方对NDV感染CEF的影响
• 摘要
• 1 材料与方法
• 1.1 试验药物及材料准备
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器
• 1.4 试验方法
• 1.5 数据分析
• 2 结果与分析
• 2.1 不同药物同种加药方式时对NDV感染CEF的影响
• 2.2 同种药物不同加药方式之间对NDV感染CEF的最高病毒抑制率比较
• 3 讨论
• 3.1 中药总黄酮成分复方的抗病毒作用
• 3.2 中药总黄酮成分复方和单味总黄酮成分比较
• 参考文献
• ABSTRACT
• 全文结论
• 论文创新点
• 致谢