诱导表达细胞CaM/CaMBP对烟草超氧化物歧化酶及其同工酶的调控效应

论文摘要

本文以诱导性表达细胞质CaM/CaMBP两个转基因烟草株系为实验材料,研究了诱导上调和下调CaM活性对SOD及其三类同工酶活性的影响。 实验内容共分两部分: 第一部分 测定了10个诱导表达细胞核CaM的转基因烟草株系的活性,从中筛选出3个能良好诱导表达的株系（5C、5L、13）:进一步深入研究了烟草幼苗经Tc诱导48小时,以及烟草离体叶圆片经Tc诱导24小时过程中CaM活性的动态变化。 第二部分 利用已经检测出的诱导表达细胞质CaM的转基因烟草H1—2C,以及诱导表达细胞质CaMBP的转基因烟草H3-19,进行SOD及其同工酶的研究。结果表明:经Tc诱导的转基因烟草H1—2C,SOD总活性、以及三种同工酶的活性明显高于对照HO2020及未经Tc诱导的;相反,经Tc诱导的转基因烟草H3-19,SOD总活性、以及三类同工酶的活性明显低于对照HO2020及未经Tc诱导的。最后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳、活性定位染色鉴别了转基因烟草叶片中SOD同工酶类型。

论文目录

• 缩写表
• 中文摘要
• 英文摘要
• Ⅰ 引言
• Ⅱ 材料与方法
• 一、植物材料
• 二、处理方法
• 三、测定方法
• 1、CaM的提取
• 2、CaM的测定
• 3、无机磷的测定
• 4、蛋白质的测定
• 5、超氧化物歧化酶的提取
• 6、超氧化物歧化酶总活性测定
• 7、超氧化物歧化酶三类同工酶测定
• 8、SOD的聚丙烯酰胺凝胶电泳及活性染色
• 9、鉴别SOD同工酶类型的染色定位法
• 四、试剂与仪器
• Ⅲ 实验结果
• 一、诱导表达细胞核CaM转基因烟草的筛选
• 1、Tc诱导24小时或48小时转基因烟草的检测结果
• 2、Tc诱导过程中转基因烟草幼苗CaM的动态变化
• 3、Tc诱导过程中转基因烟草离体叶圆片CaM的动态变化
• 二、诱导表达细胞质CaM／CaMBP对烟草SOD及其同工酶活性的影响
• 1、Tc诱导过程中转基因烟草离体叶圆片总SOD的活性变化
• 2、Tc诱导过程中转基因烟草离体叶圆片SOD同工酶的活性变化
• 2.1 SOD同工酶活性测定抑制剂终浓度的摸索
• 2.2 Tc诱导过程中转基因烟草离体叶圆片Cu、Zn-SOD的活性变化
• 2.3 Tc诱导24小时转基因烟草离体叶圆片Mn-SOD的活性变化
• 2.4 Tc诱导24小时转基因烟草叶圆片Fe-SOD的活性变化
• 3、转基因烟草离体叶圆片SOD电泳图谱及其同工酶类型
• Ⅳ 讨论
• 一、转基因烟草各株系间的CaM表达差异与原因分析
• 二、Tc诱导表达系统的表达渗漏问题
• 三、诱导表达细胞质CaM／CaMBP对烟草SOD及其同工酶的调控作用
• 四、利用凝胶电泳活性染色方法鉴别转基因烟草SOD同工酶
• Ⅴ 全文总结
• 参考文献
• 致谢