淫羊藿苷对骨质疏松大鼠MSCs定向分化干预的实验研究

论文摘要

目的从细胞形态学、标志物蛋白合成(钙结节、ALP、OC)的角度,分别观察不同浓度对对体外培养的骨质疏松Sprague Dawley大鼠MSCs成脂分化和成骨分化的影响,探讨淫羊藿苷治疗骨质疏松症的可能作用机制。方法1运用全骨髓贴壁法分离、纯化、培养Sprague Dawley大鼠MSCs。2从细胞形态学特征、DAPI染色、EdU染色、细胞的生物学特性、细胞特异性表面抗原等角度进行鉴定MSCs。3单纯运用10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml的淫羊藿苷与空白组对照,观察MSCs成脂分化状况,通过细胞形态学观察、油红0染色,探讨淫羊藿苷体外对MSCs成脂分化的影响。4单纯运用10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml的淫羊藿苷与空白组对照,不加入成骨分化诱导剂,观察诱导MSCs成骨分化,通过检测Von Kossa钙结节染色、碱性磷酸酶(ALP)活性及量和骨钙素(OC)活性及量,探讨单纯淫羊藿苷体外对MSCs成骨分化的影响。结果1.采用全骨髓贴壁法可稳定获得均质性良好的大鼠MSCs。2 DAPI染色、EdU染色检测大鼠MSCs表面标志,抗原CD133表达阳性,CD34表达阴性。3 10ng/ml、20ng/ml的淫羊藿苷对大鼠MSCs促进细胞的增殖分化,无明显抑制作用,40ng/ml的淫羊藿苷对细胞的增殖分化有一定的抑制作用。4淫羊藿苷能促进MSCs增殖与分化,10ng/ml、20ng/ml能抑制MSCs向脂肪细胞分化；40ng/ml有促进MSCs成脂分化的作用。5淫羊藿苷能促进MSCs成骨诱导后细胞体外钙化,提高细胞内ALP活性,上调骨钙素基因的表达,促进钙结节形成。结论淫羊藿苷在不加入其它成骨、成脂肪诱导剂的条件下,仍可促进MSCs的骨向分化,抑制脂肪细胞分化,其中以10ng/ml的淫羊藿苷作用最为明显,这可能是淫羊藿苷治疗骨质疏松症的可能作用机制之一。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 中英文对照词表
• 引言
• 第一章 文献研究
• 1.1 中医对本病的认识
• 1.2 骨质疏松症的现代医学研究进展
• 第二章 骨髓间充质干细胞的研究进展
• 2.1 概述
• 2.2 骨髓间充质干细胞来源、分离、纯化
• 2.3 MSCs的表面标志
• 2.4 MSCs的成骨诱导剂
• 2.5 MSCs的免疫抑制特性
• 2.6 结语与展望
• 第三章 淫羊藿及其提取物对MSCs成骨分化的影响（综述）
• 3.1 淫羊藿与MSCs研究现状
• 3.2 淫羊藿对MSCs成骨分化的影响
• 3.3 结语与展望
• 第四章 实验部分
• 第一部分 SD大鼠骨质疏松模型的建立
• 第二部分 Sprague Dawley大鼠MSCs分离、培养及鉴定
• 第三部分 细胞活力检测
• 第四部分 筛选淫羊霍苷使用浓度
• 第五部分 成脂鉴定
• 第六部分 淫羊藿苷对MSCs成骨分化的影响
• 第五章 小结与讨论
• 1 立题思路与依据
• 2 淫羊藿苷与MSCs骨向分化
• 3 骨质疏松与MSCs脂向分化
• 4 本课题的创新点
• 5 实验结果与讨论
• 参考文献
• 致谢