论文摘要
肿瘤抑制蛋白p53是维持基因组稳定性和抑制细胞恶性转化的一个重要蛋白。在半数以上的肿瘤中p53基因发生突变,其它具有野生型p53的肿瘤通常伴随有p53通路的其它调节成分的突变。因此,p53通路的失活是肿瘤发生的一个普遍事件。在细胞受到DNA损伤、原癌基因激活、染色体复制异常、低氧、营养缺乏等刺激条件下,p53被迅速激活而稳定,介导细胞周期阻滞和凋亡的能力显著增强。p53蛋白的稳定性受到多个信号途径的严密调控。MDM2是p53最重要的一个负调控因子,它可以直接结合并泛素化p53,多聚泛素化的p53被蛋白酶体识别并降解。我们通过差异表达的方法发现RLIM基因在肝癌组织中显著下调表达。来自免疫组化染色半定量分析染色半定量分析、RT-PCR和Western Blot等方法检测的结果均显示RLIM在绝大多数肝癌组织中呈下调表达。RLIM是一个含有RING结构域的泛素E3连接酶,文献中报道它可以通过蛋白酶体途径降解某些LIM-HD转录因子或辅因子,如CLIM、LMO2/LMO4、RLIM等。我们发现RLIM可以在荧光报告系统中特异性激活p53信号通路,增强p53蛋白的稳定性,促进p53依赖性的细胞凋亡和生长抑制。还证明RLIM可以和p53结合并促进p53的体内或体外泛素化,但体内较弱的泛素化能力不能显著下调p53蛋白的稳定性。我们还发现RLIM可以直接结合MDM2,并降低MDM2蛋白的稳定性。RLIM作为一个泛素E3连接酶,可以直接泛素MDM2,我们鉴定了RLIM对MDM2的泛素化位点在N端,与文献报道MDM2自身泛素化位点在C端不相重叠,这种泛素化作用是单向,MDM2不能泛素化RLIM。此外,RLIM还有非依赖于E3连接酶活性的正向调节p53作用。消减内源RLIM时可以部分地抑制UV照射引起的细胞凋亡。并且RLIM可以被DNA损伤相关激酶-Chk1磷酸化,提示RLIM调控p53的作用可能受到上游通路的影响。通过这项研究,我们发现RLIM是一个单向负调节MDM2的E3连接酶,并初步证明它参与了UV刺激调节p53稳定性地信号传导通路。
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论文中出现的英文缩写词中文摘要英文摘要前言材料和方法一、材料二、方法结果一、RLIM是一个肝癌下调表达蛋白1.免疫组化分析显示RLIM在肝癌组织中下调表达2.RLIM的mRNA和蛋白丰度在肝癌中下调表达3.RLIM在7种肝癌细胞中的表达丰度分析二、RLIM能增强p53蛋白的生物学功能1.RLIM能特异增强p53通路信号2.RLIM能增强p53的转录因子活性3.RLIM在p53野生型细胞中有促凋亡作用4.RLIM siRNA能增加S期和G2/M期细胞比率5.超表达RLIM可降低SK-hep1细胞的克隆形成率6.RLIM能增强内源p53蛋白的稳定性三、RLIM是p53的互作蛋白1.RLIM能与p53外源互作2.RLIM能与p53内源互作3.原核表达的重组RLIM与p53可直接结合4.RLIM与p53可在细胞核内共定位5.RLIM与p53互作结构域鉴定四、RLIM是p53蛋白的一个E3泛素连接酶1.RLIM能在体外泛素化p53蛋白2.RLIM能在体内泛素化p53蛋白3.RLIM对p53泛素化修饰主要为k48型泛素连接4.在p53缺陷型细胞中,RLIM对共转染表达的p53蛋白稳定性无显著影响五、RLIM能抑制MDM2对p53的降解作用1.RLIM能逆转MDM2对p53通路的抑制作用2.RLIM能逆转MDM2对p53促凋亡的抑制3.RLIM能抑制MDM2对p53的体外泛素化作用4.RLIM能抑制MDM2对p53的体内泛素化作用5.RLIM能逆转MDM2对p53的降解六、RLIM是MDM2的互作蛋白1.RLIM能与MDM2外源互作2.RLIM能与MDM2内源互作3.原核表达的重组RLIM与MDM2可直接结合4.RLIM与MDM2互作结构域的鉴定七、RLIM可降低MDM2蛋白的稳定性1.野生型RLIM可淬灭共转染的GFP—MDM2的绿色荧光2.RLIM可降低MDM2的稳定性3.RLIM可缩短MDM2的半衰期八、RLIM是MDM2的E3连接酶,单向泛素化降解MDM21.在体外实验中RLIM能增强MDM2的自身泛素化水平2.在体内实验中RLIM能增强MDM2的自身泛素化水平3.在体外实验中MDM2不能增强RLIM的自身泛素化水平,RLIM对MDM2的泛素化作用是单向的4.RLIM对MDM2的泛素化位点与MDM2自身泛素化位点不同九、RLIM还有不依赖于E3连接酶活性的正向调节P53功能的作用1.RLIM的E3连接酶失活型RLIM也能逆转MDM2对p53通路的抑制2.RLIM及片段可以封阻MDM2对p53的泛素化作用3.RLIM结合区的短肽可封阻MDM2对p53的泛素化作用十、RLIM在UV诱导的细胞凋亡途径中发挥重要作用1.消减内源RLIM的表达,可以明显降低UV照射导致的细胞凋亡2.RLIM可被DNA损伤激酶Chk1体外磷酸化讨论小结参考文献综述 泛素化系统研究进展参考文献发表论文致谢
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标签：肝细胞癌论文; 泛素化论文; 泛素连接酶论文; 凋亡论文;
环指蛋白RLIM增强p53蛋白稳定性的分子机制研究
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