论文题目: 胰腺癌中多药耐药基因MDR1的表达及其转录调控研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 外科学
作者: 徐近
导师: 倪泉兴,傅德良,金忱,虞先浚,张延龄
关键词: 胰腺癌,多药耐药基因,干扰,真核表达质粒,介入化疗
文献来源: 复旦大学
发表年度: 2005
论文摘要: 肿瘤细胞对多种化疗药物产生的多药耐药性MDR(multidrugresistance)是临床化疗失败的主要原因，MDR的形成机制复杂，目前认为MDR1基因(multidrug resistance gene 1)表达异常是导致MDR产生的主要因子。在胰腺癌的临床诊治工作中，探讨胰腺癌中MDR1基因的表达及其转录调控有重要的研究价值。 临床研究 应用免疫组织化学法和RT-PCR技术分别从蛋白和基因水平检测MDR1基因在胰腺癌临床标本中的表达，并研究其与胰腺癌根治性术后生存时间之间的关系。研究结果表明，MDR1基因的蛋白表达产物P-gp在胰腺癌中的表达(阳性率79.3％)明显高于正常胰腺、癌旁组织和胰腺良性肿瘤；RT-PCR证实同样的结果；P-gp与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、分化程度、TNM分期以及术前是否行介入化疗方面无显著性差异，但对根治性术后生存时间有一定的影响。 实验研究 通过RT-PCR检测MDR1基因在两株胰腺癌细胞株AsPC-1和BxPC-3中的表达，发现均有较高水平的基础表达。BxPC-3为原发癌细胞株，且其MDR1基因表达要略强于在AsPC-1细胞，因此选择BxPC-3细胞株作为进一步的研究对象。在体外通过逐步增加阿霉素(ADM)浓度筛选，成功构建了胰腺癌多药耐药细胞株BxPC-3／ADM，发现MDR1在诱导早期的耐药中起主导作用，在后期则和多药耐药相关蛋白(MRP)协同发挥作用；我们通过脂质体转染法将MDR1 cDNA转入BxPC-3细胞，成功获得了短时的MDR1高表达，稳定转染的单克隆表达尚有待进一步的研究。 利用RNA干扰技术，设计合成了针对MDR1基因的siRNA，并在其上下游分别引入BglⅡ和HindⅢ限制性酶切位点，通过双酶切连接反应将MDR1siRNA插入质粒载体Retro pSuper多克隆位点中的BglⅡ和HindⅢ之间，以此构建MDR1siRNA真核表达质粒RetropSuper-MDR1siRNA，应用RT-PCR行酶切鉴定，结果显示MDR1siRNA成功地载入了质粒。采用脂质体介导的方法将MDR1siRNA表达质粒转染胰腺癌细胞株BxPC-3，应用RT-PCR和Western blot方法检测BxPC-3细胞中MDR1在基因和蛋白水平的表达变化，研究结果显示MDR1siRNA表达质粒能显著抑制胰腺癌细胞BxPC-3中MDR1基因的表达，MDR1的蛋白表达水平亦受到明显抑制。 结论：研究结果表明，胰腺癌中MDR1呈高表达，并对根治术后生存时间有一定的影响。胰腺癌细胞株AsPC-1和BxPC-3存在MDR1的高表达；通过逐步增加ADM浓度，同样可以成功构建多药耐药细胞株BxPC-3／ADM；MDR1siRNA能有效地抑制胰腺癌BxPC-3细胞株MDR1的表达，siRNA技术是一有效调控MDR1基因表达的方法。
论文目录:
一、中文摘要
二、英文摘要
三、前言
四、第一部分 多药耐药基因MDR1在胰腺癌组织中的表达
1.材料
2.方法
3.结果
4.讨论
5.小结
五、第二部分 多药耐药基因MDR1在胰腺癌细胞中的表达
1.材料
2.方法
3.结果
4.讨论
5.小结
六、第三部分 siRNA对BxPC-3细胞株MDR1表达影响的实验研究
1.材料
2.方法
3.结果
4.讨论
5.小结
七、参考文献
八、结论
九、发表论文
1.胰腺癌术后介入治疗作用的探讨
2.吉西他滨胰腺区域性动脉灌注的药代动力学研究
3.胰腺癌多药耐药细胞株BxPC-3/ADM的建立及其耐药机制的初步探讨
十、文献综述
十一、致谢
发布时间: 2007-06-28
参考文献
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