冬凌草甲素的提取纯化及其环糊精包合物的研究

论文摘要

冬凌草甲素为抗癌中药冬凌草中的主要抗癌活性成分,具有资源丰富、毒性低、药理活性强等优势,近年来吸引了广大药学工作者的注意。但目前对于该药的研究主要集中在药理活性方面,对于其制剂研究较少,并且不系统,目前也没有合适的制剂投放到市场。这是主要是由于冬凌草甲素分离提纯工作的难度和它的低溶解度造成的。本文通过对冬凌草甲素理化性质的初步研究,优化了冬凌草甲素的提取纯化工艺,并对其进一步的纯化工艺进行了研究,增加了冬凌草甲素纯品的纯度和收率。为增加冬凌草甲素的溶解度,使其满足临床需要,制备了冬凌草甲素与羟丙基-β-环糊精和磺丁基醚-β-环糊精（SBE-β-CD）包合物,进一步制备了注射用冻干粉针剂,并对其进行了质量研究。最后对冬凌草甲素/磺丁基醚-β-环糊精粉针剂进行了大鼠体内药动学的研究,以考察磺丁基醚-β-环糊精对冬凌草甲素体内药动学行为的影响。对冬凌草甲素的理化性质进行了考察,侧重于平衡溶解度和稳定性。冬凌草甲素在水中溶解度较差,并随着pH的增加溶解度逐渐降低,在乙醇,甲醇等有机溶剂中溶解度较大。在溶液状态时对光、热的稳定性较差,在碱性条件下稳定性更差,不能长期放置。在固态时,冬凌草甲素稳定性较好。根据冬凌草甲素的理化性质,对其提取分离工艺进行了改进。采用乙醇冷浸提取的方法,虽然周期较长,但可以避免由于加热回流提取造成的冬凌草甲素的降解。脱色用活性炭的用量减少至药材量的5%,加热回流时间减少至10分钟。改进后的工艺可以提高冬凌草甲素粗品的收率。本文建立了对冬凌草甲素粗品进行进一步提纯的工艺。用硅胶柱层析,氯仿-丙酮9:1～8.5:1.5梯度洗脱,最终使纯度为97.13%的结晶收率为76.8%,纯度为98.26%的结晶收率为58.35%,纯度为99.2%的结晶收率达到了30.33%。为高纯度冬凌草甲素的制备提供了一种简单有效的方法。考察了HP-β-CD和SBE-β-CD对于冬凌草甲素的包合和增溶作用。制备了相溶解度曲线,证明药物与HP-β-CD和SBE-β-CD均形成摩尔比为1:1的包合物。根据相溶解度曲线计算出冬凌草甲素与HP-β-CD和SBE-β-CD包合物的包合稳定常数分别为107.7 M-1和84.25 M-1,包合效率分别为29.8%和25.7%。通过HP-β-CD包合,冬凌草甲素的溶解度最高可提高27倍。用真空冷冻干燥法制备了冬凌草甲素与HP-β-CD和SBE-β-CD的包合物,并通过DSC和核磁共振二维ROSEY图谱确证了包合物的形成。为了解决冬凌草甲素的稳定性问题,通过冷冻干燥法制备了冬凌草甲素与HP-β-CD和SBE-β-CD的包合物冻干粉针制剂,并对其进行了质量研究,发现药物稳定性较好,能够满足制剂需要。为考察SBE-β-CD对冬凌草甲素体内药动学行为的影响,对冬凌草甲素/SBE-β-CD包合物冻干粉针制剂进行了大鼠体内药动学的研究。结果显示与对照冬凌草甲素溶液相比,其冻干粉针制剂的药时曲线无明显变化,药动学参数无显著性差异,说明SBE-β-CD包合物的形成对冬凌草甲素体内药动学行为无显著影响。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 一、冬凌草和冬凌草甲素研究概况
• 二、环糊精研究概况
• 三、选题目的与依据
• 四、本课题研究思路及需要解决的问题
• 参考文献
• 第一章 冬凌草甲素理化性质的研究
• 1. 材料与仪器
• 2. 实验方法与结果
• 2.1 冬凌草甲素体外分析方法的建立和确证
• 2.1.1 测定波长的选择
• 2.1.2 色谱条件
• 2.1.3 线性关系和标准曲线
• 2.1.4 回收率实验
• 2.1.5 精密度实验
• 2.2 冬凌草甲素在各种溶剂中的平衡溶解度测定
• 2.2.1 在不同pH磷酸盐缓冲液中的溶解度
• 2.2.2 在几种常用溶剂中的溶解度
• 2.3 冬凌草甲素在水溶液中稳定性的研究
• 2.3.1 在高温下的稳定性研究
• 2.3.2 在不同pH值下的稳定性研究
• 2.3.3 在强光照射下的稳定性研究
• 2.4 冬凌草甲素在固态时的稳定性考察
• 3. 讨论
• 4. 本章小结
• 5. 参考文献
• 第二章 冬凌草甲素提取分离工艺的优化和进一步纯化工艺的研究
• 1. 材料与仪器
• 2. 实验方法与结果
• 2.1 冬凌草甲素的体外分析方法
• 2.2 冬凌草甲素提取分离工艺的优化
• 2.2.1 提取
• 2.2.2 脱色
• 2.2.3 分离
• 2.2.4 优化后冬凌草甲素的提取分离工艺
• 2.3 冬凌草甲素粗晶进一步纯化工艺的研究
• 2.3.1 重结晶法
• 2.3.2 硅胶柱层析法
• 2.3.2.1 石油醚/丙酮系统
• 2.3.2.2 氯仿/甲醇系统
• 2.3.2.3 氯仿/丙酮系统
• 2.4 冬凌草甲素提取纯化工艺总流程图
• 2.5 冬凌草甲素的结构确证
• 3. 讨论
• 4. 本章小结
• 5. 参考文献
• 第三章 冬凌草甲素与环糊精衍生物包合物的制备与结构确证
• 1. 材料与仪器
• 2. 实验方法与结果
• 2.1 含环糊精时冬凌草甲素的含量测定方法
• 2.2 冬凌草甲素与羟丙基-β-环糊精包合物的制备及确证
• 2.2.1 三种HP-β-CD对冬凌草甲素增溶效果的比较
• 2.2.2 冬凌草甲素相溶解度曲线的制备
• 2.2.3 冬凌草甲素/羟丙基-β-环糊精包合物的制备
• 2.2.4 包合物的结构确证与空间构型的推测
• 2.3 冬凌草甲素与磺丁基醚-β-环糊精包合物的制备及确证
• 2.3.1 相溶解度曲线的制备
• 2.3.2 冬凌草甲素/磺丁基醚-β-环糊精包合物的制备
• 2.3.3 包合物的结构确证
• 2.4 羟丙基-β-环糊精与磺丁基醚-β-环糊精对冬凌草甲素增溶的比较
• 2.5 羟丙基-β-环糊精与磺丁基醚-β-环糊精对冬凌草甲素溶液稳定性的影响
• 2.5.1 高温
• 2.5.2 pH
• 2.5.3 光照
• 3 讨论
• 4 本章小结
• 5 参考文献
• 第四章 注射用冬凌草甲素冻干粉针的制备及质量研究
• 1. 材料与仪器
• 2. 实验方法与结果
• 2.1 注射用冬凌草甲素冻干粉针剂的制备
• 2.1.1 处方筛选及冻干工艺的确定
• 2.1.2 渗透压的调节
• 2.1.3 制剂处方及制备工艺
• 2.1.4 制备工艺流程图
• 2.2 注射用冬凌草甲素冻干粉针剂的质量研究
• 2.2.1 复溶与溶液澄明度
• 2.2.2 酸度
• 2.2.3 稳定性实验
• 3. 讨论
• 4. 本章小结
• 5. 参考文献
• 第五章 冬凌草甲素磺丁基醚-β-环糊精包合物体内药动学的研究
• 1. 材料与仪器
• 2. 实验方法与结果
• 2.1 冬凌草甲素系列标准溶液及内标溶液的配制
• 2.1.1 冬凌草甲素标准溶液的配制
• 2.1.2 内标溶液的配制
• 2.2 分析方法的确立
• 2.2.1 色谱和质谱条件
• 2.2.2 血浆样品预处理
• 2.2.3 方法的专属性考察
• 2.2.4 标准曲线和线性范围
• 2.2.5 方法的精密度与准确度
• 2.2.6 提取回收率考察
• 2.2.7 样品稳定性考察
• 2.2.8 血浆样品的测定
• 2.3 大鼠静脉注射冬凌草甲素溶液的药物动力学
• 2.3.1 给药方案和样品采集
• 2.3.2 大鼠血浆样品的预处理和测定
• 2.3.3 药动学参数计算
• 2.3.4 测定结果
• 3. 讨论
• 4. 本章小结
• 5. 参考文献
• 全文结论
• 致谢
• 发表论文