RhoC和ROCK-1在前列腺癌中的表达及其对MAPK和Akt影响的实验研究

论文摘要

前列腺癌是男性常见的恶性肿瘤之一,在美国男性致死性恶性肿瘤中居第二位。广泛性骨转移是导致前列腺癌患者死亡的主要原因。Rho家族是近年来发现的一种小分子G蛋白,其家族成员RhoC参与细胞信号转导和肌动蛋白骨架的调节等重要生物学过程。研究表明,RhoC与肿瘤的迁移、侵袭和转移表型的获得密切相关,被认为是肿瘤转移的分子开关。Rho激酶（Rho kinase,ROCK）是Rho家族的一个主要效应分子。本研究中我们通过观察RhoC、ROCK-1在前列腺癌中的表达,探讨RhoC/ROCK-1信号转导途径在前列腺癌转移中的作用机制。料材与方法收集73例前列腺癌患者穿刺活检（15例）或手术切除（58例）的癌组织和对应的癌旁组织。前列腺癌及癌旁标本均经病理组织学确诊。根据Jewett-Whitmore-Prout系统进行临床分期,A+B期28例,C+D期45例。参照Gleason组织学分级标准,高中分化39例,低分化34例,其中有骨转移者32例。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测前列腺癌组织及癌旁组织中RhoC mRNA和ROCK-1 mRNA表达,采用Western blot和免疫组化检测RhoC和ROCK-I蛋白的表达,比较RhoC和ROCK-1在前列腺癌及癌旁组织中表达的差异,及其表达水平与患者病理分级、临床分期及有无骨转移的相关性。构建RhoC基因真核表达载体,转染前列腺癌不转移亚系PC-3M-2B4,检测RhoC与ROCK-1下游蛋白—丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和蛋白激酶B（Akt）磷酸化水平变化,探讨RhoC可能的作用机制。结果免疫组化结果：前列腺癌中RhoC和ROCK-1阳性表达率分别65.5%（38/58）和69.0%（40/58）,均显著高于癌旁组织29.3%（17/58）、34.5%（20/58）。相关分析结果显示,RhoC与ROCK-1的表达水平呈显著正相关（rs=0.487,P<0.01）。Western Blot结果：58例手术切除的前列腺癌组织中RhoC和ROCK-1蛋白表达明显高于癌旁组织。前列腺癌组织和癌旁组织中RhoC及ROCK-1与磷酸化MAPK和Akt蛋白表达具有明显的相关性。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）结果：73例前列腺癌组织标本中均可观察到RhoC mRNA和ROCK-1 mRNA表达,而在癌旁组织中表达水平较低。前列腺癌组织中,RhoC mRNA和ROCK-1 mRNA的半定量RT-PCR灰度均值分别为0.61±0.18和0.65±0.21,均显著高于癌旁组织（0.29±0.09,0.33±0.12；均P<0.05）。RhoC mRNA和ROCK-1 mRNA在前列腺癌组织中的阳性率分别为72.6%（53/73）和68.5%（50/73）,在对应的癌旁组织中分别为34.2%（25/73）和38.4%（28/73,P<0.01）。前列腺癌组织中RhoC mRNA和ROCK-1 mRNA表达与临床病理参数的关系：随着前列腺癌患者临床分期的增加以及骨转移的出现,RhoC和ROCK-1蛋白的阳性表达率逐渐增高。RhoC mRNA和ROCK-1 mRNA在骨转移组中的表达高于未转移组,差异有统计学意义（P<0.05）。在高分化的前列腺癌中RhoC mRNA和ROCK-1 mRNA高表达,但与低分化前列腺癌相比,差异无统计学意义（P>0.05）。RhoC基因转染PC-3M-2B4细胞后磷酸化MAPK和Akt的表达：细胞转染后,RhoC的表达较对照组明显增加,RhoC的高表达可以使MAPK和Akt的磷酸化水平相应增加,未转染对照组细胞内MAPK和Akt磷酸化水平（0.182±0.026和0.318±0.041）与转染空载体组（0.262±0.096和0.325±0.071）水平相似,而正义转染组细胞MAPK和Akt磷酸化水平（0.913±0.086、1.037±0.035）明显升高（P<0.01）。结论（1）RhoC和ROCK-1在前列腺癌组织中的表达高于癌旁组织,且与肿瘤转移相关。（2）RhoC和ROCK-1可能通过活化MAPK和Akt参与了前列腺癌的形成、浸润和转移。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 英文缩写索引
• Rh0C和ROCK-1在前列腺癌中的表达及 其对MAPK和Akt影响的实验研究
• 引言
• 第一部分 Rh0C和ROCK-1在前列腺癌与癌旁组织中的表达
• 前言
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 RhoC和ROCK-1mRNA的表达
• 2.2 RhoC和ROCK-l蛋白的表达
• 2.3 免疫组化检测结果
• 2.4 前列腺癌组织Roh/CROCK-1蛋白表达、以及其与临床病理参 数和骨转移相关性分析
• 3 讨论
• 4 小结
• 5 参考文献
• 第二部分 前列腺癌中RhoC和ROCK-1对MAPK 和Atk的影响
• 前言
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 Rh0C基因转染PC-M-2B4细胞后磷酸化MAPK和Atk的表达
• 2.2 RohC与磷酸化MAPK和Atk蛋白表达相关性
• 3 讨论
• 4 小结
• 5 参考文献
• 结论
• 综述
• 参考文献
• 个人简历
• 致谢