芸薹根肿菌Plasmodiophora brassicae拮抗菌的筛选及其种衣剂的研制

论文摘要

十字花科蔬菜根肿病是由芸薹根肿菌(Plasmodiophora brassicae)引起的一种危害较重的世界性土传病害。该病侵染植株根部,严重时引起植株根部腐烂乃至全株枯死,造成重大经济损失。本研究以生物防治根肿病为主要目的,采集茶树、红豆树、银杏树和白菜的根际土和根、茎、叶、枝条等样品带回实验室分离拮抗菌,并且通过测定根肿病菌休眠孢子萌发率来筛选拮抗菌株。以两株对根肿病休眠孢子抑制作用较好的拮抗细菌为研究材料,对这两株拮抗细菌的发酵条件进行了研究。通过一系列的筛选试验,筛选出种衣剂中主要助剂的种类及用量,确定了种衣剂配方,并分别对白菜和油菜种子进行了包衣处理,通过包衣种子的盆栽试验和田间试验对两株细菌的抑病效果进行了研究。试验结果如下：1.拮抗菌的分离、筛选和鉴定试验分离到细菌345株,放线菌218株,真菌139株,共分离到菌株702株,经过筛选,得到15个菌株对根肿病休眠孢子有较好抑制作用,其中有细菌7株,分别为X203、X6、X189、X144、X85、X15、X169；放线菌8株,分别为F118、F144、F187、F86、F13、F183、F36、F121。其中X203对根肿病休眠孢子的抑制作用最好,抑制率高达68.42%,X189、F36和F118的抑制效果也较好,抑制率均超过65%。经初步鉴定X203和X189均为芽孢杆菌(Bacillus spp.).2.生防细菌X203和X189的发酵条件对X203和X189两株细菌进行了发酵条件对菌体产生量影响的研究,测定的发酵条件有培养基种类、碳源、氮源、温度、pH值、初始接菌量、摇瓶装料量和发酵时间等。结果表明,X203的最佳发酵条件是：培养基为NYBD培养基,碳源为葡萄糖,氮源为酵母浸膏,温度为32℃,pH值为6,初始接菌量为0.5%,装料量20 mL／250 mL,培养时间为36 h。X189的最佳发酵条件是：培养基为YSP培养基,碳源为淀粉,氮源为酵母浸膏,温度为28℃,pH值为7,初始接菌量5%,装料量20 mL／250 mL,培养时间为48 h。3.生防菌剂种衣剂的研制对两株拮抗细菌进行了种衣剂制剂的研究,通过正交试验确定了主要助剂的种类和用量,正交试验测定的指标是油菜种子的发芽率以及种衣剂的主要理化性状。最终确定了助剂种类为糊精、拉开粉、羧甲基纤维素钠,它们的用量分别为3%、1.5%、1%；通过种衣剂性状检测试验,证实了以两种细菌为活性物质制成的种衣剂各项指标都达到了国家标准。4.生防菌剂种衣剂的防治试验对制成的种衣剂成品进行盆栽防效试验和田间防效试验。试验结果表明,X203和X189两株拮抗细菌对白菜和油菜根肿病都有较好的生防作用,X203包衣处理对白菜的防效最高,盆栽试验防效达到62.62%,田间试验达到61.52%。X189的防效比X203略低,两株拮抗菌株包衣处理对白菜和油菜品种盆栽试验防效均在56.52%和62.62%之间,田间防效在58.25%和61.52%之间。两株拮抗细菌在包衣后的防效明显高于拮抗菌培养液灌根,多菌灵药剂灌根防治根肿病的防效居于拮抗菌株包衣处理和拮抗菌培养液灌根处理之间。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一章 文献综述
• 1 十字花科根肿病的概述
• 1.1 根肿病的症状
• 1.2 根肿病菌的分类
• 1.3 根肿病的病害循环
• 1.4 根肿病的防治现状
• 1.4.1 培育和选用抗病品种
• 1.4.2 土壤改良
• 1.4.3 加强栽培管理
• 1.4.4 实行轮作
• 1.4.5 苗床消毒
• 1.4.6 化学防治
• 2 植物病害生物防治研究现状
• 2.1 植物病害生防细菌的研究
• 2.2 植物病害生防真菌的研究
• 2.3 植物病害生防放线菌的研究
• 3 种衣剂的发展概况和应用前景
• 3.1 种衣剂的类型
• 3.2 常规种衣剂的研究进展
• 3.3 生物种衣剂的研究进展
• 3.4 种衣剂在十字花科蔬菜上的应用
• 3.5 种衣剂技术及其开发前景
• 第二章 十字花科根肿病菌拮抗菌的分离、筛选和鉴定
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 仪器设备
• 2.1.2 常用试剂的配置
• 2.1.3 供试培养基
• 2.1.4 分离材料的采集
• 2.1.5 病原菌菌种来源
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 十字花科根肿病拮抗菌的分离
• 2.2.2 十字花科根肿病菌拮抗菌的筛选
• 2.2.3 拮抗菌X203和X189菌株的初步鉴定
• 3 结果与分析
• 3.1 拮抗菌的分离结果
• 3.2 拮抗菌的筛选结果
• 3.3 拮抗菌X203和X189菌株的初步鉴定
• 3.3.1 培养性状
• 3.3.2 菌体形态特征
• 3.3.3 生理生化特性
• 4 结论与讨论
• 第三章 拮抗细菌发酵条件的初步研究
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.2.1 试验仪器
• 2.2.2 供试培养基
• 2.2.3 供试菌种
• 2.2.4 种子液的制备
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 培养基对拮抗细菌产生量的影响
• 2.2.2 碳源对拮抗细菌产生量的影响
• 2.2.3 氮源对拮抗细菌产生量的影响
• 2.2.4 温度对拮抗细菌产生量的影响
• 2.2.5 pH值对拮抗细菌产生量的影响
• 2.2.6 初始接菌量对拮抗细菌产生量的影响
• 2.2.7 装料量对拮抗细菌产生量的影响
• 2.2.8 发酵时间对拮抗细菌产生量的影响
• 3 结果与分析
• 3.1 培养基对拮抗细菌产生量的影响
• 3.2 碳源对拮抗细菌产生量的影响
• 3.3 氮源对拮抗细菌产生量的影响
• 3.4 温度对拮抗细菌产生量的影响
• 3.5 PH值对拮抗细菌产生量的影响
• 3.6 初始接菌量对拮抗细菌产生量的影响
• 3.7 装料量对拮抗细菌产生量的影响
• 3.8 发酵时间对拮抗细菌产生量的影响
• 4 结论与讨论
• 第四章 种衣剂的制备和性状检测
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 试验仪器
• 2.1.2 供试助剂
• 2.1.3 供试品种
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 助剂的筛选
• 2.2.2 种衣剂的制备及种子包衣
• 2.2.3 种衣剂性状的测定
• 3 结果与分析
• 3.1 单个助剂筛选
• 3.2 种衣剂配方和配比的确定
• 3.3 种衣剂性状的测定
• 4 结论与讨论
• 第五章 种衣剂防效试验
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 供试品种
• 2.1.2 供试药剂
• 2.1.3 供试病原菌
• 2.1.4 供试拮抗菌
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 种衣剂盆栽防效试验
• 2.2.2 种衣剂田间防效试验
• 3 结果与分析
• 3.1 盆栽防效结果
• 3.2 田间防效结果
• 4 结论与讨论
• 参考文献
• 致谢