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TRAIL分子在佐剂性关节炎大鼠中功能的初探及野菊花总黄酮对其分泌的调节

2020-12-02阅读(850)

TRAIL分子在佐剂性关节炎大鼠中功能的初探及野菊花总黄酮对其分泌的调节

论文摘要

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL,亦被称为Apo2L）:是最近发现的续Fas和TNF之后的第三个死亡因子。它选择性诱导转化细胞和肿瘤细胞的凋亡而保护大多数正常细胞免于受损的特性,突破了TNF-a、FasL等分子在体内应用的局限性。国外试验证实TRAIL可诱导类风湿性关节炎滑膜细胞发生凋亡,同时国内外多项研究也发现了TRAIL在调节免疫平衡方面的重要作用。因此,基于TRAIL系统的药物研发为那些因免疫调节紊乱与激活诱导的细胞死亡（activation-induced cell death,AICD）障碍所导致的自身免疫性疾病如:类风湿性关节炎、糖尿病、甲状腺炎、系统性红斑狼疮等的治疗带来新希望。野菊花总黄酮（total flavonoids of Chrysanthemum indicum,TFC）是从传统中药野菊花中分离提取得到的有抗炎、镇痛和免疫调节作用的有效部位,动物实验表明其对佐剂性关节炎大鼠（adjuvant arthritis,AA）具有明显的防治作用。为进一步探讨其作用机制,本文在前期研究基础上,以佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞和成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes,FLS）为研究对象,检测TRAIL分子的功能表达,并进一步研究TRAIL分子对AA FLS凋亡的调控及TFC的治疗作用,以期从TRAIL系统的角度探讨TFC的作用机制。1 TRAIL分子在佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞以及滑膜细胞上的表达以AA大鼠腹腔巨噬细胞以及滑膜细胞为研究靶点,免疫细胞化学法检测AA大鼠PMφ、FLS中TNF-α、TRAIL蛋白表达的变化,RT-PCR法测定相应TNF-α、TRAIL mRNA的含量。与文献报道相符,TNF-α在AA大鼠PMφ、FLS中蛋白表达以及mRNA基因表达均明显升高;同时发现:与TNF-α的表达变化相左,TRAIL在AA大鼠PMφ、FLS中蛋白以及mRNA的表达均低于正常组大鼠。2 TRAIL分子对AA FLS凋亡的调控及TFC的治疗作用在前期基础上,检测TFC对AA大鼠的关节局部肿胀、多发性关节炎指数、免疫器官指数及病理形态学等改变,进一步明确了TFC对AA大鼠的防治作用;采用MTT法检测滑膜细胞增殖反应,TUNEL及流式细胞术分析滑膜组织及细胞的凋亡改变,发现TFC(84,168,336 mg·kg-1,ig)可剂量依赖性地抑制滑膜细胞的过度增殖并诱导细胞凋亡。提示:诱导滑膜细胞凋亡可能是TFC治疗AA大鼠的新机制。为探讨TFC诱导滑膜细胞凋亡的可能机制,用rhTRAIL+AA FLS/rhTRAIL+AA FLS+Caspase 8 Inhibitor体外共培养,流式细胞术检测各组凋亡率。结果提示:TRAIL分子可剂量依赖性地通过caspase 8外源性凋亡通路诱导AA FLS的凋亡:采用免疫荧光法检测TFC对AA大鼠滑膜组织分泌TNF-α、TRAIL的影响。TFC(84,168,336 mg·kg-1,ig)可下调AA大鼠膝关节滑膜组织中TNF-α的过高表达。而TRAIL在AA模型组大鼠滑膜组织中的表达较正常组减弱,TFC可上调TRAIL在AA大鼠膝关节滑膜组织中的过低表达。提示:TFC可能通过调节滑膜组织中TRAIL的分泌作用于TRAIL系统,从而调节滑膜细胞增殖与凋亡之间的平衡。

论文目录

  • 英文缩略词
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 正文:
  • 第一部分 TRAIL分子在佐剂性关节炎大鼠功能细胞上的表达
  • 1.前言
  • 2.实验材料
  • 3.实验方法
  • 3.1 大鼠AA模型的建立
  • 3.2 腹腔巨噬细胞（PMΦ）的制备
  • 3.3 大鼠滑膜细胞的分离、培养与鉴定
  • 3.4 AA大鼠PMΦ中TNF-α表达的变化
  • 3.5 AA大鼠PMΦ中TRAIL分子表达的变化
  • 3.6 AA大鼠FLS中TRAIL分子表达的变化
  • 3.7 统计学处理
  • 4.结果
  • 4.1 AA大鼠PMΦ中TNF-α表达的变化
  • 4.2 AA大鼠PMΦ中TRAIL分子表达的变化
  • 4.3 AA大鼠FLS中TRAIL分子表达的变化
  • 5.讨论
  • 6.小结
  • 第二部分 TRAIL分子对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的调控及野菊花总黄酮的治疗作用
  • 1.前言
  • 2.实验材料
  • 3.实验方法
  • 3.1 大鼠AA模型的制备
  • 3.2 分组及给药方案
  • 3.3 HE染色法观察TFC对AA大鼠膝关节病理的影响
  • 3.4 TFC对从大鼠继发性炎症的治疗和免疫调节作用
  • 3.5 TFC对AA大鼠滑膜细胞增殖与凋亡的影响
  • 3.6 TRAIL诱导AA大鼠滑膜细胞凋亡的作用
  • 3.7 TFC对AA大鼠滑膜组织TRAIL、TNF-α蛋白表达的检测
  • 3.8 统计学处理
  • 4.结果
  • 4.1 TFC对AA大鼠继发性炎症的治疗作用
  • 4.2 HE染色法观察TFC对AA大鼠膝关节病理的影响
  • 4.3 TFC对AA大鼠滑膜细胞增殖反应与凋亡的影响
  • 4.3.1 MTT法检测TFC对AAFLS增殖反应的抑制作用
  • 4.3.2 TFC对AA大鼠滑膜细胞凋亡的影响
  • 4.3.2.1 TUNEL法检测结果
  • 4.3.2.2 流式细胞仪检测结果
  • 4.4 TRAIL诱导AA大鼠滑膜细胞凋亡的作用
  • 4.4.1 TRAIL诱导滑膜细胞凋亡的剂量确定
  • 4.4.3 TRAIL诱导滑膜细胞凋亡的时效关系
  • 4.4.4 Caspase 8抑制剂对TRAIL诱导滑膜细胞凋亡的影响
  • 4.5 TFC对AA大鼠滑膜组织TRAIL、TNF-α蛋白表达的检测
  • 5.讨论
  • 6.小结
  • 参考文献
  • 附录:个人简历
  • 致谢
  • 综述
  • 参考文献
  • 附图

    • 相关论文文献

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