论文摘要
目的:通过体外培养大鼠心肌细胞,建立柯萨奇病毒B3m(CVB3m)感染心肌细胞的病毒性心肌炎模型,探讨柴胡、黄芩及其配伍对感染CVB3m心肌细胞的抗病毒与保护作用,并试阐述机制。 方法: 1.应用“通法”制取中药复方小柴胡汤中君臣药及其配伍的含药血清。 2.测定含药血清的最大无毒剂量和病毒毒力。 3.采用体外培养法培养乳鼠心肌细胞。 4.含药血清体外对CVB3m毒力的影响。 5.观察病毒感染后3、5天的心肌细胞的形态学变化,细胞病变及心肌细胞的搏动百分比。 6.应用MTT法检测各含药血清不同给药时间对CVB3m感染的心肌细胞的保护率。 7.检测不同给药时间,不同时间点各孔上清液中乳酸脱氢酶及天冬氨酸氨基转移酶的释放量,比较各含药血清对CVB3m感染的心肌细胞的保护作用环节。 8.应用RT-PCR法检测不同含药血清通过不同时间给药对感染CVB3m的心肌细胞中CVB3m的含量,探讨不同含药血清对CVB3m复制的影响。 结果: 1.黄芩提取物含药血清对CVB3m有直接灭活的作用。 2.观察感染CVB3m后心肌细胞的搏动百分比和细胞病变,三组药物组与空白血清组均有显著性差异(P<0.05~0.01)。在预防组中,柴胡组和配伍组与黄芩组均有显著性差异(P<0.01),柴胡组和配伍组无显著差异(P>0.05)。在治疗组中,黄芩组和配伍组与柴胡组均有显著性差异(P<0.01),黄芩组和配伍组均无显著差异(P>0.05)。 3.应用MTT法检测结果显示三组药物组心肌细胞的保护率与空白血清组均有显著性差异(P>0.01),在预防组中,柴胡组和配伍组显出明显的优势较黄芩组(P<0.01),而柴胡组与配伍组无明显差异(P>0.05)。在治疗组中,黄芩组和配伍组与柴胡组比较,有显著性差异(P<0.01),而黄芩组与配伍组无明显差异(P>0.05)。 4.三组药物血清均能使乳酸脱氢酶及天冬氨酸氨基转移酶的释放量明显降低,提高细胞存活率,在预防组中,柴胡组和配伍组与黄芩组比较,有显著性差异(P<0.01),而柴胡组与配伍组无明显差异(P>0.05)。在治疗组中,黄芩组和配伍组与柴胡组比较,有显著性差异(P<0.01),而黄芩组与配伍组无明显差异(P>0.05)。 5.应用RT-PCR法测定感染CVB3m后3、5天心肌细胞中CVB3m含量,正常细胞组未检测到
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