重组牛亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒疫苗的构效研究

论文摘要

牛亚洲Ⅰ型口蹄疫是发生于牛的传染性疾病,牛亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒（AsiaⅠFoot-and-mouth disease virus, AsiaⅠFMDV）是引起该病的病原体。研究表明,FMDV诱生的中和抗体可以阻断FMDV的感染,而FMDV衣壳蛋白VP1是诱生中和抗体的关键抗原,而VP1上140～160位氨基酸组成的G-H环是关键的结构,尤其是其顶部的高度保守的Arg-Gly-Asp （RGD）序列,此RGD是FMDV结合宿主细胞受体的主要位点,也是中和抗体结合的主要靶点。为了研制一种强效的牛重组AsiaⅠFMDV蛋白疫苗,我们从牛AsiaⅠFMDV VP1的功能结构域中选取了一个B细胞表位和两个T细胞表位的编码基因,构建了四种重组疫苗的原核表达载体,并在大肠杆菌（E.coli）中成功表达了四种蛋白,将它们分别命名为XA1、XA2、XA3和XA4。功能实验结果表明,四种蛋白在诱生中和抗体的能力方面存在差异,其中XA1免疫豚鼠产生的抗体几乎没有保护效果,而其他三种重组蛋白能诱生高水平的保护性中和抗体,但它们的免疫原性也不完全相同。为此,我们对四种蛋白的结构进行了比较,发现重组蛋白疫苗的基因片段的长度,连接次序,重复次数等均有可能影响疫苗的免疫效果。本研究为研制高效的牛重组AsiaⅠFMDV蛋白疫苗及其它的重组疫苗提供了构效方面的实验依据。

论文目录

提要

前言

1. 灭活 FMDV 疫苗

2. 合成肽疫苗

3. 病毒载体疫苗

4. 核酸疫苗

5. 重组蛋白疫苗

材料和方法

1. 引物的设计

2. 主要试剂

3. 主要方法

4. 动物免疫

5. 细胞中和实验

6. 乳鼠中和实验

实验流程

实验结果

1. 四种重组 FMDV 蛋白疫苗的设计

2. XA1, XA2, XA3, XA4 基因片段的体外合成

3. XA1, XA2, XA3, XA4 基因的构建

4. XA1, XA2, XA3, XA4 的诱导表达、鉴定及纯化

5. XA1, XA2, XA3, XA4 的功能实验

6. 重组蛋白的结构比对分析

图表

讨论

1. 重组 FMDV 蛋白疫苗的设计

2. 重组蛋白基因的构建

3. 重组蛋白结构与功能间的关系

结论

参考文献

中文摘要

ABSTRACT

硕士期间的成果

致谢

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