B型流感病毒核酸疫苗和CpG基序免疫增强作用研究

论文摘要

本论文介绍了B型流感病毒DNA疫苗以及CpG基序作为佐剂对其免疫增强效应的研究。 血凝素（Hemagglutinin,HA）和神经氨酸酶（neuraminidase,NA）是B型流感病毒两种最重要的抗原蛋白,本文首先探讨了一次接种B型流感病毒（B/Ibaraki/2/85）DNA疫苗对BALB/c小鼠的免疫保护作用。分别采用不同剂量的HA DNA疫苗（100μg、50μg、10μg、5μg、1μg）,NA DNA疫苗（50μg、10μg、5μg、1μg）,以及HA和NA联合DNA疫苗（10μg、5μg、1μg）,一次接种BALB/c小鼠。接种后四周,用致死量流感病毒（B/Ibaraki/2/85）攻击小鼠,病毒攻击后三天,取血清检测抗-HA和抗-NA抗体。同时测定小鼠肺部病毒含量,观察记录小鼠存活率和体重丢失情况。结果发现:100μg HA DNA疫苗,10μg NA DNA疫苗以及5μg联合DNA疫苗（HA+NA）接种的小鼠全部存活。结合小鼠肺部病毒含量和体重变化数据,得出以下结论:一次接种DNA疫苗可以为小鼠提供完全有效的保护,联合DNA疫苗免疫保护作用强于单一DNA疫苗,NA DNA疫苗免疫保护作用略强于HA DNA疫苗。 为了探讨CpG基序作为免疫佐剂的效应,本研究构建了包含CpG基序的质粒:pcD3d（+CpG）HA和不包含CpG基序的质粒pcD3d（-）HA。并采用不同的剂量,不同的免疫次数（一次或两次）,分别免疫BALB/c小鼠,初免后四周（或加强免疫后一周）,用致死量流感病毒（B/Ibaraki/2/85）攻击小鼠,病毒攻击后三天,取血清检测抗-HA IgG抗体,并观察小鼠存活率和体重变化情况。结果显示,含CpG基序的DNA疫苗能够进一步提高抗体水平,改善小鼠病毒攻击后的临床体症。实验表明CpG基序能有效提高小鼠抗B型流感病毒攻击的能力。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1 流感
• 2 B型流感病毒
• 3 B型流感病毒主要抗原蛋白
• 3.1 血凝素
• 3.2 神经氨酸酶
• 3.3 其他抗原蛋白
• 4 流感疫苗
• 5 本论文内容和结构概述
• 第二章 B型流感病毒DNA疫苗免疫保护作用研究
• 1 引言
• 2 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.2 实验方法
• 3 实验结果分析
• 3.1 一次接种HA DNA疫苗可使小鼠抗致死量B型流感病毒攻击
• 3.2 一次接种NA DNA疫苗可使小鼠抗致死量B型流感病毒攻击
• 3.3 一次接种联合DNA疫苗可使小鼠抗致死量B型流感病毒攻击
• 3.4 一次接种DNA疫苗诱导的体液免疫应答
• 4 讨论
• 第三章 CPG基序对DNA疫苗免疫增强作用研究
• 1 引言
• 2 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.2 实验方法
• 3 实验结果分析
• 3.1 重组质粒的构建与鉴定
• 3.2 CpG基序能提高小鼠抗-HA IgG抗体产生水平
• 3.3 CpG基序能提高小鼠的存活率
• 3.4 CpG基序能降低小鼠体重丢失
• 3.5 CpG基序对小鼠免疫应答类型的影响
• 4 讨论
• 参考文献
• 结束语
• 缩写表
• 致谢
• 读研期间文章发表和录用情况
• 湖南师范大学学位论文原创性声明