不同体色萍乡红鲫皮肤组织学、黑色素浓集激素受体及细胞色素b基因的研究

论文摘要

本研究对四种表型（全黑、半黑、花斑、全红）萍乡红鲫的鳞片及皮肤色素细胞进行了光学显微镜观察,并对其皮肤进行了组织学研究,克隆了萍乡红鲫黑色素浓集激素受体基因的部分片段,并对其在组织中的分布和表达情况进行了研究,同时克隆了萍乡红鲫的Cyt b基因,分析比较了萍乡红鲫在进化上的地位。主要内容如下:1.利用光学显微镜对四种表型萍乡红鲫鳞片及皮肤进行了观察,发现其鳞片都只含有三种色素细胞,即黑色素细胞、黄色素细胞和虹彩细胞;而其皮肤都只含有黑色素细胞和黄色素细胞;不同表型的萍乡红鲫鳞片和皮肤色素细胞的分布存在差异,主要表现在黑色素细胞的形态和分布上。通过常规石蜡切片技术,对全红萍乡红鲫的皮肤进行了组织学观察,发现其色素细胞不仅存在于表皮层与真皮层之间、真皮层与皮下层之间,在腺层和皮下层中也有分布;2.克隆了全红萍乡红鲫MCHR2基因编码区的部分cDNA序列,长度为366 bp,编码122个氨基酸;用荧光定量PCR检测了MCHR2基因在全红萍乡红鲫组织中的分布以及四种表型红鲫大脑和皮肤组织中的分布,结果发现MCHR2在全红萍乡红鲫肝脏中表达量最高,在肾中表达量最低,其次依次是眼、肌肉、鳃、大脑、肠和心脏;在四种表型红鲫大脑组织中,MCHR2的表达量无显著差异;而在皮肤组织中,全红表型与全黑表型的MCHR2表达量都存在显著差异,而与花斑表型及半黑表型间无显著差异。3.克隆了萍乡红鲫MCHR1a和MCHR1b基因部分cDNA序列,通过BALST比对发现,其间有96%的同源性;利用RT-PCR技术检测发现MCHR1a和MCHR1b在组织中的分布和表达量基本一致,因此,认为萍乡红鲫MCHR1a和MCHR1b基因是同一个基因,改名为MCHR1,即萍乡红鲫MCHR1基因并未发生分化,经拼接获得了其编码区的部分cDNA序列,长度为481 bp,编码160个氨基酸;4.克隆了四种表型红鲫线粒体细胞色素b基因完整编码区,发现其序列完全一致,长度为1 140 bp,编码380个氨基酸。表明萍乡红鲫群体尽管部分个体在表型上存在差异,但并没有在分子水平上发生改变,没有形成亚种。运用邻接法构建的分子系统树表明萍乡红鲫与普通鲫鱼亲缘关系最近。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 文献综述
• 1.1 鱼类体色的研究进展
• 1.1.1 体色的生态意义
• 1.1.2 色素细胞的形态结构及其呈色机理
• 1.1.3 影响鱼类体色的主要因素
• 1.2 黑色素浓集激素的研究进展
• 1.2.1 MCH
• 1.2.2 MCH受体
• 1.3 线粒体基因与Cyt b基因
• 1.3.1 线粒体基因组
• 1.3.2 线粒体Cyt b基因
• 1.4 本研究的目的意义及主要内容
• 第2章 萍乡红鲫鳞片及皮肤色素细胞的观察
• 2.1 实验材料和方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 方法
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 鳞片色素细胞的观察
• 2.2.2 皮肤的组织学观察
• 2.3 讨论
• 第3章 萍乡红鲫MCHR基因部分cDNA克隆与表达特性研究
• 3.1 材料和方法
• 3.1.1 实验材料
• 3.1.2 主要试剂
• 3.1.3 主要溶液成分及配制
• 3.1.4 主要仪器与设备
• 3.1.5 引物设计
• 3.1.6 RNA的抽取
• 3.1.7 RNA的检测
• 3.1.8 cDNA第一链合成
• 3.1.9 MCHR基因部分cDNA片段克隆
• 3.1.10 荧光定量PCR检测红鲫不同表型及组织MCHR2基因表达
• 3.1.11 半定量PCR检测不同组织中MCHR1基因的表达
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 总RNA的提取
• 3.2.2 MCHR基因片段的克隆
• 3.2.3 MCHR基因部分cDNA片段分析
• 3.2.4 荧光定量PCR检测萍乡红鲫不同组织MCHR2基因的表达
• 3.2.5 荧光定量检测不同表型红鲫大脑和皮肤MCHR2基因的表达
• 3.2.6 半定量PCR检测不同组织中MCHR1基因的表达
• 3.3 讨论
• 3.3.1 萍乡红鲫MCHR基因片段的克隆及分析
• 3.3.2 萍乡红鲫MCHR基因组织表达分布
• 第4章 萍乡红鲫线粒体细胞色素b基因序列分析
• 4.1.材料和方法
• 4.1.1 主要仪器设备
• 4.1.2 主要试剂的配制
• 4.1.3 实验材料
• 4.1.4 实验方法
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 DNA的提取
• 4.2.2 PCR扩增
• 4.2.3 序列测定结果
• 4.2.4 Cyt b基因片段序列分析
• 4.2.5 萍乡红鲫Cyt b与几种鱼类的碱基序列比较
• 4.3 讨论
• 第5章 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附图
• 攻读学位期间的研究成果