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半导体量子点单克隆抗体荧光探针的制备及对细胞内蛋白质分子的检测

2020-12-02阅读(783)

半导体量子点单克隆抗体荧光探针的制备及对细胞内蛋白质分子的检测

论文摘要

目的:用最大发射波长分别605nm、525nm的半导体量子点（semiconductor quantum dots QDs）分别与Smad4、Smad2单克隆抗体偶联后制备成水溶性的分子探针。并检测两种量子点在偶联前的光学性质、对大鼠牙乳头细胞（rat dental papillae cells,RDPCs）的生物相容性及偶联后分子探针的光学性质和生物识别特异性。方法:①选择刚出生3天的新生SD大鼠,取出磨牙牙胚,分离牙乳头,用酶消化法培养SD大鼠牙乳头细胞,用波形丝蛋白和细胞角蛋白免疫化学染色鉴定细胞来源,观察细胞的生长规律;②把605QDs、525QDs及两种量子点等浓度的混合物按3种不同浓度与RDPCs共同培养,观察QDs对RDPCs生长和形态的影响;③用MTT法检测不同浓度的605QDs、525QDs及两种量子等浓度的混合物对RDPCs的毒性作用。④用化学偶连法制备水溶性的605QDS-Smad4、525QDS-Smad2单抗荧光探针并纯化;⑤测定605QDS-Smad4、525QDS-Smad2单抗荧光探针的吸收光谱、发射光谱并用激光共聚焦显微镜对605QDS-Smad4、525QDS-Smad2单抗荧光探针的光学性质进行检测;⑥TGF-β1和大鼠牙乳头细胞共同孵育24h后,采用SP免疫细胞化学法和605QDS-Smad4、525QDS-Smad2单抗荧光探针直接免疫荧光成像法观察比较Smad4、Smad2在大鼠牙乳头细胞内的分布,并检测细胞内605QDS-Smad4、525QDS-Smad2单抗荧光探针的光学性质。结果:①:体外培养的RDPCs生长良好,波形丝蛋白染色阳性而细胞角蛋白染色阴性。②不同浓度的605QDs、525QDs及两种量子点的等浓度混合物对体外培养的RDPCs没有毒性作用,对其生长和形态也没有影响。③605QDs、525QDs分别与Smad4、Smad2单抗通过共价结合形成稳定的605QDs-Smad4、525QDs-Smad2单抗荧光探针,605QDs-Smad4、525QDs-Smad2单抗荧光探针对大鼠牙乳头细胞内Smad4分子仍具有特异性的识别能力;605QDs-Smad4、525QDs-Smad2单抗荧光探针仍具有QDS所具有的激发光谱宽,发射光谱窄,荧光度强,光化学稳定性好等光学特征。结论:①605QDs、525QDs及两种量子点等浓度的混合物在一定的浓度范围内对RPDCs具有良好的生物相容性,为605QDs、525QDs在活体生理条件下用于活细胞内的多通道信号研究提供了科学的证据。②生物修饰的半导体量子点和单抗共价结合形成分子探针后仍具有特异免疫识别能力和独特的光学性质,这为半导体量子点用于对活细胞内蛋白质等生物单分子进行实时、原位、长时间动态视踪检测提供了科学依据和基础。

论文目录

  • 英汉缩略语名词对照
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 前言
  • 参考文献
  • 第一部分 最大发射波长为605mm 和525mm 两种量子点的光学性质测
  • 1 材料和方法
  • 2 结果
  • 3 讨论
  • 参考文献
  • 第二部分 半导体量子点对原代培养大鼠牙乳头细胞生物相容性的研究
  • 1 材料和方法
  • 2 结果
  • 3 讨论
  • 参考文献
  • 第三部分 半导体量子点单克隆抗体荧光探针的制备、纯化及光学性质表征
  • 1 材料和方法
  • 2 结果
  • 3 讨论
  • 参考文献
  • 第四部分 605QDs-Smad4 和525QDs-Smad2 单抗荧光探针分别对大鼠牙乳头细胞内Smad4 和Smad2 分子特异性识别检测
  • 1 材料与方法
  • 2 结果
  • 3 讨论
  • 参考文献
  • 文献综述
  • 全文总结
  • 致谢
  • 攻读硕士期间发表文章

    • 相关论文文献

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