Th17在难治性Graves病中的作用机制

论文摘要

Graves病（GD）是一种常见的自身免疫性疾病,机体中存在甲状腺自身抗体及甲状腺组织中有大量的淋巴细胞浸润。CD4+T细胞在GD发病中起重要作用,Th17细胞是一类新的T细胞亚群,属于CD4+效应T细胞。Th17细胞主要效应因子是IL-17,IL-17具有强大的致炎性,通过受体（IL-17R）介导炎性反应,在许多炎性反应和自身免疫性疾病中起重要作用。在GD患者中,特别是难治性GD患者其Th17细胞比例较缓解期GD增高;在GD动物模型中发现,IL-17基因敲除的小鼠不产生甲亢,证实了Th17在GD发病中起一定的作用。PPARγ激动剂噻唑烷二酮类（TZD）,具有显著的抗炎症反应的作用,并可抑制Th17细胞的分化。本实验研究Th17在难治性GD发病中的作用,及PPARγ激动剂的干预作用,期望为GD的治疗提供新的策略。一、Th17、IL-17及IL-17R在Graves病中的表达情况目的:研究GD不同疾病阶段患者血清IL-17的水平,Th17、IL-17及IL-17R与难治性GD免疫病理的关系。方法:1、ELISA法检测GD不同疾病阶段患者（初发未治组38例,难治性GD组36例,缓解组34例,正常对照组37例）血清IL-17水平。2、免疫组织化学检测难治性GD（13例）和正常甲状腺组织（11例）中Th17细胞和IL-17R的表达。3、Real-time PCR法测定甲状腺浸润淋巴细胞IL-17及甲状腺细胞IL-17及IL-17R表达水平。4、流式细胞仪及免疫荧光检测甲状腺细胞IL-17R的表达。结果:1、初发未治GD、难治性GD患者血清IL-17水平较正常人增高,难治性GD血清IL-17水平较初发未治GD增高,缓解期GD与正常人相比血清IL-17水平无明显增高。2、难治性GD甲状腺组织中浸润淋巴细胞的IL-17mRNA表达量较正常甲状腺组织中分离的淋巴细胞高。3、难治性GD甲状腺组织浸润淋巴细胞中存在分泌IL-17的Th17细胞,难治性GD甲状腺细胞存在IL-17R的表达,正常甲状腺细胞则未检出IL-17和IL-17R蛋白的表达。说明Th17与难治性GD的免疫病理有关。二、IL-17对甲状腺细胞生长功能和炎症因子表达的影响及信号转导机制目的:研究IL-17对正常和难治性GD患者甲状腺细胞生长和功能的影响,IL-17单独或联合TSAb对甲状腺细胞IL-17R及炎症因子IL-6、CXCL10和ICAM-1表达的影响,及其参与的信号转导机制。方法:1、MTT法检测细胞存活率。2、化学发光法检测细胞T3、T4的分泌量。3、Real-time PCR法测定甲状腺细胞IL-6、CXCL10和ICAM-1基因表达。4、ELISA法检测细胞IL-6、CXCL10表达。5、流式细胞仪检测细胞IL-17R、ICAM-1表达。6、Westernblot法检测细胞信号通路蛋白P38MAPK、JNK、ERK1/2及NF-κBP65表达。7、免疫荧光检测NF-κBp65核转移。结果:1、IL-17对正常和难治性GD甲状腺细胞生长和分泌T3、T4功能无明显影响。2、难治性GD甲状腺细胞IL-6、CXCL10及ICAM-1表达较正常甲状腺细胞明显增多。3、IL-17可增强难治性GD甲状腺细胞IL-6、CXCL10和ICAM-1基因和蛋白的表达,呈时效和量效关系,但对正常甲状腺细胞无影响。4、TSAb可促进难治性GD和正常甲状腺细胞IL-6、CXCL10和ICAM-1表达。5、IL-17与TSAb联合加强难治性GD和正常甲状腺细胞IL-6、CXCL10和ICAM-1表达。6、IL-17对两种甲状腺细胞IL-17R的表达均无影响,TSAb可以上调正常甲状腺细胞膜IL-17R的表达,对难治性GD甲状腺细胞IL-17R表达无明显影响。7、IL-17与IL-17R结合后,可通过P38MAPK及NF-κB信号通路诱导难治性GD甲状腺细胞炎症因子的分泌。三、PPARγ激动剂吡格列酮对IL-17作用下难治性GD甲状腺细胞的干预及相关机制目的:研究吡格列酮对IL-17作用下难治性GD甲状腺细胞的IL-6、CXCL10和ICAM-1表达的影响及其与MAPK、NF-κB信号通路的关系。方法:1、MTT法检测甲状腺细胞存活率。2、Real-time PCR法测定甲状腺细胞IL-6、CXCL10和ICAM-1基因表达。3、ELISA、流式细胞仪检测IL-6、CXCL10和ICAM-1蛋白的表达。4、Westernblot法检测吡格列酮干预下P38MAPK、JNK、ERK1/2及NF-κB的变化情况。结果:1、0-50μM的吡格列酮对难治性GD甲状腺细胞生长无明显影响,100μM吡格列酮可抑制细胞生长。2、吡格列酮（0-50μM）可抑制IL-17作用下难治性GD甲状腺细胞IL-6、CXCL10分泌及ICAM-1表达,呈量效关系;同时可抑制三者的基因表达。3、吡格列酮（10μM）可抑制IL-17诱导的难治性GD甲状腺细胞P38MAPK和NF-κB炎症信号的激活,但对JNK和ERK无影响。结论:1、初发未治GD、难治性GD患者血清IL-17水平增高,且难治性GD患者血清IL-17水平高于初发未治GD患者;难治性GD甲状腺组织存在Th17细胞浸润及IL-17R的表达,证实Th17与GD特别是难治性GD的发病及免疫病理有关。2、IL-17与IL-17R结合后,可通过P38MAPK及NF-κB途径促进难治性GD甲状腺细胞炎症因子的释放,与TSAb联合后上述作用明显增强。3、PPARγ激动剂吡格列酮可通过P38MAPK及NF-κB信号通路抑制IL-17诱导的难治性GD甲状腺细胞分泌炎症因子。以上研究结果表明Th17在难治性GD发病机制中起重要作用,PPARγ激动剂吡格列酮可抑制IL-17诱导的炎症因子释放,因此PPARγ激动剂在治疗难治性GD中具有一定的潜在价值。

论文目录

• 英文缩略语
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 Th17、IL-17 和 IL-17R 在 Graves 病中的表达情况
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第二部分 IL-17 对甲状腺细胞生长功能和炎症因子表达的影响及信号转导机制
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第三部分 PPARγ激动剂吡格列酮对IL-17 作用下难治性GD 甲状腺细胞的干预及机制
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 总结
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢