清活Ⅰ号中药复方保护血管内皮细胞高糖损伤的抗氧化应激分子机制及冠心病患者氧化应激水平测定

论文摘要

目的：前期研究发现清活Ⅰ号中药方可以降低糖尿病患者尿微量白蛋白排泄率，并具有与天然抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）类似的保护血管内皮细胞高糖损伤的作用。本研究目的是探索清活Ⅰ号中药方保护血管内皮高糖损伤的抗氧化应激分子机制。 方法：采用电子顺磁共振波谱仪（EPR）和氧自由基捕获技术检测清活Ⅰ号中药复方及其各组方单味药体外清除氧自由基的能力，观察该中药复方对高糖培养bEnd.3内皮细胞氧自由基生成的影响。应用中药血清药理学研究方法观察该中药复方的药物血清对高糖培养SD大鼠肺微血管内皮细胞增殖的影响。运用Real time RT-PCR检测该中药复方对高糖培养bEnd.3内皮细胞解偶联蛋白（UCP）基因mRNA表达的影响，以及蛋白印迹方法测定细胞UCP蛋白分子的表达情况。 结果：清活Ⅰ号复方可淬灭体外羟自由基模型中82.2％的自由基，其组方单味药除了3号药外，其它组方单药可使模型中羟自由基减少23.1％～46.2％，中药复方和各组方药在一定浓度范围内，其淬灭氧自由基的作用存在量效关系。清活Ⅰ号复方的药物血清和NAC一样可改善高糖培养的SD大鼠肺微血管内皮细胞的增殖和活力。内皮细胞bEnd.3高糖培养时，EPR检测到了细胞生成的超氧阴离子明显增多，清活Ⅰ号中药、超氧岐化酶和NAC均可减少高糖培养内皮细胞氧自由基的生成，各组EPR检测到的氧自由基信号较高糖培养组分别下降了70％、56％和47.3％。Real time RT-PCR检测结果：UCP-1、UCP-3在5.56mM葡葡糖培养组bEnd.3细胞（NG组）和高糖培养的各组bEnd.3细胞中表达量很少或不表达，UCP-2基因mRNA的表达是单纯高糖培养组细胞（HG组）较NG组增高（p=0.09），清活Ⅰ号中药（中药组）和NAC（NAC组）干预后则较HG组进一步明显上调（p分别为0.009、0.036）。Western blot分析则在中药组检测到的较明显的UCP-2蛋白分子的表达，NAC组有少量表达，HG组和NG组未检测到明显的UCP-2分子的表达。 结论：1．清活Ⅰ号中药复方及其各组方药均有较强的体外淬灭氧自由基作用，其中复方淬灭氧自由基的能力要明显强于任何单味组方药；2．清活Ⅰ号复方的药物血清具有类似天然抗氧化剂NAC减轻或是消除高糖致内皮细胞损伤的作用；3．高糖可导致血管内皮细胞超氧阴离子生成增多，清活Ⅰ号中药方具有清除细胞生成的超氧阴离子作用；4．清活Ⅰ号保护血管内皮损伤作用除了与该中药方具有直接淬灭氧自由基作用外，还可能与清活Ⅰ号中药能上调高糖环境中内皮细胞UCP-2的表达，减少线粒体超氧阴离子生成有关。目的：评价冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）患者氧化应激状态和血管内皮功能相关血清指标变化，为有抗氧化和保护血管内皮功能作用的清活Ⅰ号中药方用于冠心病患者治疗提供临床循证医学证据。 方法：正常健康对照200人，经冠状动脉造影检查（CAG）诊断的冠心病患者200例（CAG阳性组）和经CAG排除的非冠心病患者135例（CAG阴性组）。评估各组人群的糖、脂代谢等情况，分光比色法测定血清抗超氧阴离子自由基(O2-．)活力、脂质过氧化物（MDA）、一氧化氮合酶（总NOS和iNOS）活性和一氧化氮（NO）水平并进行组间比较。 结果：CAG阳性组的血清抗O2-．活力、总NOS和iNOS、NO水平均明显低于正常对照组，血清MDA水平则明显高于正常对照组（p均＜0.001）。CAG阳性组血清抗O2-．活力与CAG阴性组相近（p=0.634），但MDA水平仍高于CAG阴性组，并且总NOS、iNOS和NO水平低于GAG组（p≤0.001）。CAG阴性组血清抗O2-．活力比正常对照组低（p=0.002），MDA水平高于正常对照组（p=0.001），总NOS水平两组见相近（p=0.967），但CAG阴性组的iNOS和NO水平较正常对照组低（p≤0.001）。CAG阳性组中糖调节异常者的比率（55.5％）高于CAG阴性组（37％）（p=0.001）。 结论：冠心病患者存在血管内皮功能障碍，体内氧化应激水平较高，其血清清除超氧阴离子能力下降；冠心病患者常合并糖调节异常；有抗氧化作用和保护内皮细胞高糖损伤作用的中药复方清活Ⅰ号可能有助于糖尿病患者和非糖尿病患者冠心病的防治。

论文目录

• 摘要
• 第一部分摘要
• 摘要
• Abstract
• 第二部分摘要
• 摘要
• Abstract
• 第一部分 清活I号中药复方保护血管内皮细胞高糖损伤的抗氧化应激分子机制
• 引言
• 一、清活I号中药体外抗氧化能力测定
• 实验材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 二、中药血清药理学研究方法观察清活I号中药保护内皮细胞高糖损伤作用
• 实验材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 三、清活I号中药对高糖培养内皮细胞超氧阴离子生成的影响
• 实验材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 四、清活I号中药保护血管内皮细胞高糖损伤的抗氧化应激分子机制研究
• 实验材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第二部分 冠状动脉粥样硬化心脏病患者氧化应激水平测定
• 引言
• 研究对象和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录
• 发表综述
• 发表文章
• 英文缩略词