论文摘要
背景和目的:观察微囊HepA、HepG2细胞转瓶培养时转速、细胞密度对细胞增殖的影响。方法:一步法AC微囊包裹HepG2及第25代HepA细胞,随机分为2大组:试验组为HepA细胞组;对照组为HepG2细胞组。每组按包埋的细胞密度、转瓶转速分8小组,所包埋的细胞密度分别为:1.0X106、2.0X106,转瓶转速分别为0RPM、2RPM、3RPM、4RPM,初始细胞数目均为1.0X107,动态观察并测量各组聚集体大小、数目、细胞数目变化,Elivision plus免疫组化法检测各组Ki67表达情况。结果:各组每个微囊内聚集体平均个数从第2天的1.1-4.5个迅速增至第8天3.2-13.1个,每个微囊内聚集体平均最大径从第2天的23.8-68.7um迅速增至第8天44.9-128.9um,之后增长减缓,至第14天聚集体个数达5.4-18.5个,最大径达50.6-183.4um。无论任何时间点,静止培养组Ki-67强阳性百分率均最低(d20-5%,d740-45%,d1210-20%),弱阳性百分率最高(d270-75%,d745-50%,d1275-80%);4RPM组Ki-67强阳性百分率均最高(d265-70%,d7100%,d1275-80%),弱阳性百分率最低(d230-35%,d70%,d1220-25%);各组第1天均处于相对静止期,第2天进入对数增长期,第8天达到高峰,静止培养组、2RPM组、3RPM组、4RPM组扩增倍数分别达到初始数目的4.02-4.79倍、17.69-19.79倍、22.95-25.83倍、35.11-36.87倍,之后增长速度渐趋缓慢,第8天至第10天,各组扩增倍数不及第8天的五分之一,第14天各组扩增倍数分别达到初始数目的近5.87-6.42倍、23.86-24.88倍、30.18-30.89倍、43.06-43.92倍。结论:微囊HepA、HepG2细胞各组随转速增加,每个微囊内聚集体平均最大径、平均个数明显增多;Ki-67强阳性百分率逐渐升高,弱阳性百分率逐渐降低;细胞增长速度明显加快（P均等于0.00）;但均与包裹细胞密度关系不大（P均大于0.05）;各组在各个时间点每个微囊内聚集体平均最大径、平均个数、Ki-67强阳性百分率、弱阳性百分率、细胞数目无明显区别（P均大于0.05）。背景和目的:观察微囊HepA、HepG2细胞转瓶培养时转速、细胞密度对细胞功能活性的影响。方法:分组方法同第一部分,Elisa动态检测各组白蛋白合成量,全自动生化仪分析尿素合成量,HPLC法检测安定转化功能,半定量RT-PCR检测各组CYP450-3A4、CYP450-2E1、Cx32表达量。结果:微囊HepA、HepG2各组白蛋白合成量从第2天的0.14-0.71pg/cell/h迅速增加,至第10天达到高峰0.60-3.50pg/cell/h,而后迅速衰减,第14天各组均检测不到白蛋白合成。尿素合成功能微囊HepA、HepG2组分别从第2天的0.09-0.23pg/cell/h、0.16-0.62pg/cell/h迅速增至第10天达高峰0.46-4.92pg/cell/h、0.60-6.68pg/cell/h,而后迅速衰减,至第14天,仅0.13-2.51pg/cell/h、0.19-3.72pg/cell/h。安定转化功能HepA、HepG2组分别从第2天的0.41-2.42pg/cell/h、0.12-0.69pg/cell/h迅速增至第10天1.67-11.87pg/cell/h、0.71-5.08pg/cell/h之后迅速衰减,第12天仅0.62-5.77pg/cell/h、0.24-1.72pg/cell/h,第14天均检测不到。半定量RT-PCR:静止培养各组细胞CYP3A4、CYP2E1、Cx32 Ct比值任何时间点均小于1;旋转培养微囊HepA各组CYP3A4在任何时间点均大于1;Cx32、CYP2E1第7天比值均大于1,第12天Cx32仅4RPM组大于1,CYP2E1 3RPM、4RPM组均大于1;微囊HepG2各组Cx32在任何时间点均小于1;CYP3A4、CYP2E1第2、7天比值均大于1,第12天各组CYP3A4比值均小于1,CYP2E1 3RPM组、4RPM组均大于1。结论:各组随转速增加,细胞尿素、白蛋白合成量、安定清除量,Cx32、CYP3A4、CYP2E1表达量均明显增多（P均等于0）;但均与包裹细胞密度关系不大（P均大于0.05）;微囊HepA各组在各个时间点的尿素合成量、安定清除量、Cx32、CYP3A4表达量均明显比HepG2高（P均小于0.05）,白蛋白合成量、CYP2E1表达量二者无明显区别（P=0.84）。