论文摘要
目的围生期窒息引起的缺氧缺血性脑损伤(HIBD),常危及新生儿生命,是导致儿童神经系统伤残的常见原因之一。近年研究发现,促红细胞生成素(EPO)在新生儿HIBD发病机制中起重要作用。本实验通过制备新生大鼠HIBD模型,腹腔注射外源性重组人促红细胞生成素(rhEPO),观察不同剂量EPO对新生HIBD大鼠脑组织Bcl-2及Bax蛋白表达的影响,探讨EPO神经保护作用的分子机制,以期为临床治疗新生儿HIBD提供有效的方法和途径。方法1.制备HIBD模型:将新生7日龄Wistar大鼠行颈部正中切口,分离结扎左侧颈总动脉后给予低氧(8%O2,92%N2)处理2小时,制成HIBD模型。观察缺氧时动物行为变化,并于光镜下观察脑组织病理改变。2.行为能力检查:分别于手术前及缺氧后1小时对每只大鼠进行翻身能力、夹尾左旋测试。3.Bcl-2及Bax蛋白表达测定:42只新生7日龄Wistar大鼠随机分为假手术组、HIBD组、生理盐水对照组、EPO干预组,其中EPO干预组又分为大、中小、剂量三组,每组7只动物,于缺氧结束后立即一次性腹腔注射给药,应用免疫组织化学染色方法,观察给药24小时后Bcl-2及Bax蛋白表达变化。结果1.行为能力检查术前每只大鼠均做翻身能力、夹尾左旋测定,42只全部正常。缺氧后1小时假手术组测定结果同前。经历缺氧缺血的35只大鼠,19只不能翻身,28只出现夹尾左旋,13只表现不能翻身和夹尾左旋同时存在。2.HE染色及光镜检查结果假手术组:脑组织结构及细胞层次清楚,神经元形态正常,无脑水肿。HIBD组;脑组织水肿明显,神经元排列紊乱,胞体皱缩,胞质深染,核浓缩,结构不清,伴有胶质细胞增生。3.Bcl-2蛋白表达检测结果Bcl-2蛋白在假手术组中存在低水平表达,HIBD后表达明显增高,EPO干预组较生理盐水对照组及HIBD组更高。生理盐水对照组与HIBD组相比,EPO大、中、小剂量三组两两相比差异无统计学意义(P>0.05)。其余各组间比较均有显著性差异(P<0.05)。4.Bax蛋白表达检测结果Bax蛋白在假手术组中表达微弱,HIBD后表达明显增高,EPO干预组较生理盐水对照组及HIBD组表达降低。生理盐水对照组与HIBD组相比,EPO大、中、小剂量三组两两相比差异无统计学意义(P>0.05)。其余各组间比较均有显著性差异(P<0.05)。5.Bcl-2与Bax比值的变化Bcl-2/Bax在脑组织缺氧缺血性损伤后降低,EPO干预后又升高。生理盐水对照组与HIBD组相比,EPO大、中、小剂量三组两两相比差异无统计学意义(P>0.05)。其余各组间比较均有显著性差异(P<0.05)。结论1.通过对缺氧缺血后动物行为能力观察及脑组织病理学检查,证实新生鼠HIBD模型制作成功。2.EPO通过上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,下调促凋亡蛋白Bax表达,改变Bcl-2/Bax,抑制脑细胞凋亡起到神经保护作用,为EPO临床治疗新生儿HIBD提供了更深层次的理论依据。
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