论文摘要
目的:短串连重复序列（STR）遗传标记系统,由于在人类基因组中分布广泛,并具有高度的遗传多态性及简单快捷的检测方法而被广泛应用于法医学等领域。目前应用常染色体STR基因座和线粒体DNA等遗传标记已能够解决大部分个体识别和亲权鉴定案例。然而,当DNA样本由于各种原因而高度降解时,应用目前常规的STR检测技术经常会出现大片段等位基因丢失的现象,难以得到完整的DNA分型。线粒体DNA（mtDNA）高度变异区的分析虽已较为广泛应用,但由于单倍体和母系遗传的特征,以及检测方法繁琐且成本较高,其应用具有一定的局限性。MiniSTR基因座分析技术是通过将PCR引物的设计尽可能靠近重复区域而缩短扩增片段长度的一种新方法,应用于高度降解DNA样本检测,可提高检测成功率。MiniSTR基因座被欧洲DNA分型工作组（EDNAP）定义为继STR之后的新一代遗传标记。美国、日本、西班牙等国家也相继报道了对D1S1677 ,D2S441 ,D4S2364 ,D10S1248 ,D22S1045等五个miniSTR基因座的群体遗传学数据及其法医学应用价值,而我国相关报道较少并缺乏群体遗传学数据。本研究选取D1S1677 ,D2S441 ,D4S2364 ,D10S1248 ,D22S1045等五个miniSTR基因座,调查其在中国汉族人群中的遗传多态性,并探讨其法医学应用价值。方法:采用chelex 100法提取115份中国汉族无关个体全血基因组DNA。将D1S1677 ,D4S2364 ,D10S1248 ,D22S1045四个基因座的上游引物5’端用6-FAM荧光标记,D2S441基因座的上游引物用VIC荧光标记,对所有样本的五个miniSTR基因座进行PCR扩增,其中D2S441与D10S1248两个基因座进行复合扩增,其余基因座单体系扩增。PCR产物在ABI3100 Avant基因分析仪上电泳分型,结果用GeneScan 3.7及Genotyper3.7软件进行分析,利用计数法计算基因频率及遗传多态性参数。选取既往案例中使用商品化STR试剂盒（Ampf/STR Identifiler,Applied Biosystems）未能完整分型的疑难检材DNA样本9例,其中高度腐败尸体血4例,微量检材3例,腐蚀金属表面血迹2例（依次编号为19）,利用miniSTR分析技术检测分析并与商品化STR试剂盒所得结果进行比较。结果: 115份全血样本中,D1S1677,D2S441 ,D4S2364 ,D10S1248 ,D22S1045五个miniSTR基因座均获得了清晰的基因型分型图谱,扩增片段长度均小于125bp。分别共检出7,8,5,8,8个等位基因和12,21,10,16,18种基因型,其基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡。五个基因座在中国汉族人群的杂合度观察值（Ho）和多态性信息含量（PIC）分别依次为0.6609,0.6957,0.7478,0.7652,0.7826和0.5658,0.7107, 0.5919,0.7106,0.7489;非父排除率（PE）和个人识别力（PD）分别依次为0.3530,0.4824,0.3637,0.4901,0.5023和0.7954,0.8902,0.8113,0.8913,0.9032。五个miniSTR基因座的累积非父排除概率为0.9459,累积个人识别力为0.999953。D2S441与D10S1248两个基因座进行复合扩增,其电泳图谱清晰,115例样本均得到完整分型。9例高度降解DNA样本在五个miniSTR基因座中均得到了完整分型,显示了miniSTR技术比常规STR试剂盒具有更高的分型成功率。结论:D1S1677,D2S441 ,D4S2364 ,D10S1248 ,D22S1045五个miniSTR基因座在中国汉族人群中具有较好的遗传多态性,可应用于群体遗传学研究及法医学实践。D2S441与D10S1248两个基因座可进行复合扩增并能得到完整分型。MiniSTR技术应用于高度降解DNA检材的个人识别及亲子鉴定中比常规STR试剂盒分型成功率高。
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