抗HIV-1 Tat蛋白单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

论文摘要

艾滋病（AIDS）是由人免疫缺陷病毒（HIV）感染引起的一种获得性免疫缺陷综合征。目前HIV常规的检测方法分为筛查试验和确认试验,最常用的筛查方法是酶联免疫吸附试验（ELISA）,另外还有一些快速检测方法。确认试验包括免疫印迹试验（WB）、条带免疫试验（LIATEK HIVⅢ）、放射免疫沉淀试验（RIPA）及免疫荧光试验（IFA）,目前国内常用的确认试验是WB。这些检测方法的敏感性及特异性都比较好,但由于均是检测HIV抗体,对于一些已经感染HIV,但仍不能检测到抗体（即“窗口期”）的样本,可能存在漏检,需要用检测抗原或者核酸的方法作为辅助试验。常用的HIV抗原检测为P24抗原检测,但P24抗原在机体感染HIV不同时期存在很大的波动性,因而存在漏检的可能性,而PCR检测HIV核酸的方法又存在假阳性高、操作复杂等问题。因此,以在HIV感染早期出现、含量较为稳定、检测便捷的抗原作为HIV新的抗原检测的靶点,建立新的抗原检测方法,可作为HIV-1抗体不确定或窗口期感染者的辅助诊断方法。转录激活蛋白（Tat蛋白）属于调控蛋白,为HIV-1的反式激活因子。Tat为HIV最早表达的蛋白质之一,因此将检测Tat蛋白作为HIV感染窗口期及早期检测的辅助手段,受到了人们的关注。本研究拟制备Tat蛋白的单克隆抗体（mAb）,以建立新的HIV抗原检测的方法。实验首先以Tat蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备并获得了针对Tat蛋白的3株mAb,分别命名为A10、E2、C10。采用间接ELISA法进一步鉴定了mAb的特异性:将上述3株mAb分别与Tat蛋白、gp41-5多肽及Bcsp31蛋白进行反应,结果3株mAb均与Tat蛋白发生反应,与gp41-5多肽和Bcsp31蛋白均不反应,表明我们制备的mAb具有较高的特异性;将这3株mAb作相对亲和力的比较,其高低依次为C10> E2> A10;位点相加竞争ELISA法分析其抗原表位,发现本研究所获得的3株mAb中,A10与E2、C10针对的抗原表位有差异,E2与C10针对不同的抗原表位。在此基础上,选取mAb A10为包被抗体,辣根过氧化物酶（HRP）标记的C10作为酶标抗体建立了双抗体夹心ELISA法。采用该方法检测20份HIV-1抗体阳性感染者血清中的Tat蛋白,结果共检出6份,检出率为30%。本研究制备了针对Tat蛋白的mAb,对其特异性、相对亲和力等进行了研究,初步建立起以此mAb为基础的、新的HIV抗原检测方法,并将其应用于样本检测,取得了初步的结果。此外,本mAb的制备,还可能为以Tat蛋白为靶点的、新的抗HIV方法提供途径和依据。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 文献回顾
• 研究内容
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 个人简历和研究成果
• 致谢