药用植物八角莲和六角莲的组培—栽培及鬼臼毒素含量分析

论文摘要

八角莲（Dysosma versipellis）和六角莲（Dysosma pleiantha）都是小檗科八角莲属（Dysosma Woods.）的多年生草本植物,为民间传统治疗毒蛇咬伤、风湿等的中草药。近年来,又发现其含有的鬼臼毒素等成分具有抗肿瘤的效果,以鬼臼毒素为前体合成的一些抗癌药物已经开发成功并临床应用。然而,由于滥采乱挖八角莲已经濒临灭绝,现被列入国家濒危植物名录。本文通过对八角莲和六角莲不同野生居群进行了野外调查,对其组培快繁和移栽（包括组培苗和野生苗）进行了研究,并利用HPLC对不同野生居群八角莲和六角莲及八角莲组培品中鬼臼毒素含量等进行了测定,为八角莲的保护和资源开发利用奠定了一定的基础,研究结果如下:在野外调查和八角莲移栽试验中发现,八角莲从原产地移栽到试验地大棚后,其物候发生了一定的变化,开花和结实等都提前,有些植株休眠期消失。各个不同地方的八角莲花、果实的形态各异,有些差异可以作为区别不同八角莲的依据。在组培苗移栽试验中发现环境的光强对于八角莲的生长有直接影响,光线太强容易使八角莲被灼伤而提前倒苗。在郁闭度为0.7的树林下八角莲生长良好;而在阳光直射的地方八角莲在春末夏初就开始出现被阳光灼伤的迹象,随之植株提前倒苗。以八角莲和六角莲的胚为外植体进行离体培养,发现在合适的培养基上胚可以长出子叶和根,适合的培养基有MS+IBA0.5+BA1.0+GA34.0（诱导子叶和根）、MS+BA1.0 mg/L+TDZ2 mg/L和MS+BA0.2mg/L+NAA0.5mg/L（诱导胚愈伤化）,MS+BA0.2mg/L+NAA0.5mg/L和MS+IBA0.5 mg/L+BA1.0 mg/L+GA34 mg/L组合对于金佛山八角莲胚丛芽和根的诱导效果较好。以六角莲的芽为外植体,在含有一定激素的培养基上可以诱导芽长成完整植株。在鬼臼毒素含量分析中,我们得出了以下几点结论:1)不同居群的八角莲鬼臼毒素含量差异显著,中国东部、中部和西部的八角莲鬼臼毒素含量差异显著,与分子标记分析得出的八角莲地理谱系分化相似,其中中部的八角莲鬼臼毒素含量最高（达1.54%）,西部峨眉山群体为最低（0.35%）;2)八角莲在花果期鬼臼毒素含量较高,在7月份达到最高（1.02%）;3)六角莲中鬼臼毒素含量（不到0.2%）,不适合开发。4)来自峨眉山的组培苗移栽不同年限后积累的鬼臼毒素不同,移栽第二年即可达到0.58%,高于野生植株近2倍,这说明仿生栽培可提高含量,建议2-3年生的组培苗植株可入药。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• Abstract
• 目录
• 第一章 前言
• 1.1 八角莲属研究概况
• 1.1.1 八角莲属的特点
• 1.1.2 八角莲和六角莲物种概况
• 1.1.2.1 八角莲物种介绍
• 1.1.2.2 六角莲物种介绍
• 1.1.3 八角莲和六角莲快繁研究
• 1.1.3.1 八角莲快繁研究
• 1.1.3.2 六角莲快繁研究
• 1.1.4 八角莲和六角莲居群遗传结构与濒危机制研究
• 1.1.4.1 八角莲居群遗传结构
• 1.1.4.2 八角莲濒危机制
• 1.1.4.3 六角莲群体遗传结构
• 1.1.5 八角莲人工栽培研究
• 1.1.6 八角莲属化学成分及其利用研究
• 1.1.6.1 八角莲化学成分研究
• 1.1.6.2 组培八角莲化学成分研究
• 1.1.7 八角莲产品开发现状
• 1.2 八角莲主要有效成分
• 1.3 高效液相色谱分析（HPLC）及其在中药研究和八角莲有效成分研究中的应用
• 1.3.1 高效液相色谱法简介
• 1.3.2 高效液相色谱法在中药研究中的应用
• 1.3.3 高效液相色谱法在八角莲有效成分分析中的应用
• 1.4 存在问题及研究内容
• 第二章 六角莲野外观察、迁地移栽和组织培养
• 2.1 六角莲野外观察
• 2.1.1 方法
• 2.1.2 六角莲生境因子和种群伴生种
• 2.1.2.1 六角莲生境因子
• 2.1.2.2 六角莲野外种群伴生种
• 2.1.3 六角莲生长与繁育
• 2.2 六角莲移栽观察
• 2.3 六角莲组织培养与快繁
• 2.3.1 材料与方法
• 2.3.2 结果分析
• 2.3.2.1 以野生六角莲芽为外植体进行组培
• 2.3.2.2 以六角莲种子胚为外植体组培
• 2.4 讨论
• 2.4.1 六角莲生境
• 2.4.2 种子成熟程度和激素对六角莲组培影响
• 第三章 八角莲野外观察、迁地移栽及组培快繁研究
• 3.1 八角莲生境因子和种群伴生种
• 3.1.1 八角莲生境因子记录
• 3.1.2 八角莲野外种群伴生种
• 3.2 移栽于植物园的野生八角莲栽培观察
• 3.2.1 野生八角莲移栽后的物候期
• 3.2.1.1 金佛山八角莲物候观察
• 3.2.1.2 天堂寨八角莲物候观察
• 3.2.2 不同居群的八角莲茎秆颜色差异
• 3.2.3 不同居群的八角莲的花形态的观察
• 3.2.4 不同居群八角莲果实的比较
• 3.2.5 不同居群的八角莲种子胚比较
• 3.3 八角莲组培快繁及移栽试验
• 3.3.1 外植体材料
• 3.3.2 结果分析
• 3.3.2.1 组培苗芽为外植体组培
• 3.3.2.2 以八角莲种子胚为外植体组培
• 3.4 组培八角莲的栽培与种植
• 3.4.1 光强对八角莲生长的影响
• 3.4.2 不同年份栽种的八角莲生长势
• 3.4.2.1 不同栽培年限八角莲的不同生长势
• 3.4.2.2 八角莲生长趋势
• 3.4.3 组培八角莲开花与结果
• 3.4.4 组培苗药用部位（根状茎）的生长势
• 3.5 讨论
• 3.5.1 外植体选择对八角莲快繁的影响
• 3.5.2 激素对愈伤和芽诱导的影响
• 3.5.3 八角莲栽培中该注意的问题
• 第四章 不同来源八角莲属鬼臼毒素含量的比较分析
• 4.1 仪器、试剂与材料
• 4.1.1 仪器与试剂
• 4.1.2 材料
• 4.2 方法
• 4.2.1 色谱条件
• 4.2.2 标准曲线的制备
• 4.2.3 待测样品制备
• 4.2.4 方法学考察
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 含量测定方法
• 4.3.1.1 精密度试验
• 4.3.1.2 重复性试验
• 4.3.1.3 对照品稳定性试验
• 4.3.1.4 加样回收率试验
• 4.3.1.5 标准曲线的制备
• 4.3.2 结果与分析
• 4.3.2.1 不同产地野生八角莲鬼臼毒素含量比较
• 4.3.2.2 不同产地野生六角莲鬼臼毒素含量比较
• 4.3.2.3 同一产地不同季节八角莲鬼臼毒素含量的动态变化
• 4.3.2.4 不同生长阶段的组培植株根状茎鬼臼毒素含量比较
• 4.4 讨论
• 4.4.1 产地对八角莲鬼臼毒素含量影响
• 4.4.2 生长阶段和生长环境对八角莲中鬼臼毒素含量的影响
• 4.4.3 物种对鬼臼毒素含量的影响
• 4.4.4 不同提取方法对八角莲中鬼臼毒素含量的影响
• 第五章 总结与展望
• 5.1 总结
• 5.2 展望
• 参考文献
• 在读期间的主要科研工作和成果