本文主要研究内容
作者贾宾,张维,郭豫杰,孔江南,杨雪宸,庞博文,杨国宇,郑悦亭（2019）在《大肠杆菌二核苷酸环化酶催化c-di-GMP生物合成》一文中研究指出：环二鸟苷酸（bis-（3’-5’）-cyclic dimeric guanosine monophosphate, c-di-GMP）是广泛存在于细菌中的第二信使分子,可通过STING （stimulator of interferon genes）信号通路参与先天免疫应答,是一种潜在的疫苗佐剂。为明确其先天免疫调节机制和评估免疫佐剂效果,c-di-GMP的高效合成急需解决。为建立一种相对简单、高效的c-di-GMP生物合成方法 ,实现体外制备c-di-GMP,本研究构建大肠杆菌（Escherichia coli）二核苷酸环化酶（dinucleotide cyclase V, DncV）重组表达载体,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropy-β-D-thiogalactoside, IPTG）诱导表达和His亲和纯化获得目的蛋白DncV;利用超高效液相色谱（ultra performance liquid chromatography, UPLC）检测DncV重组蛋白体外催化GTP生成c-di-GMP的反应。研究结果表明,IPTG诱导型表达载体pET-28a-His-DncV构建成功,亲和纯化获得的DncV重组蛋白纯度达到92%;该重组蛋白能够通过酶促反应一步生成c-di-GMP;金属离子对该酶活性影响显著,其中3种金属离子(Mg2+, Mn2+, Co2+)可提高催化效率,另外7种金属离子(Cu2+, Zn2+, Ni2+, Mo2+, Bo2+, Fe2+, Ca2+)抑制酶促反应。本研究建立了E. coli DncV重组蛋白催化合成c-di-GMP的方法体系,为c-di-GMP的大规模制备和功能研究提供了基础资料。
Abstract
huan er diao gan suan （bis-（3’-5’）-cyclic dimeric guanosine monophosphate, c-di-GMP）shi an fan cun zai yu xi jun zhong de di er xin shi fen zi ,ke tong guo STING （stimulator of interferon genes）xin hao tong lu can yu xian tian mian yi ying da ,shi yi chong qian zai de yi miao zuo ji 。wei ming que ji xian tian mian yi diao jie ji zhi he ping gu mian yi zuo ji xiao guo ,c-di-GMPde gao xiao ge cheng ji xu jie jue 。wei jian li yi chong xiang dui jian chan 、gao xiao de c-di-GMPsheng wu ge cheng fang fa ,shi xian ti wai zhi bei c-di-GMP,ben yan jiu gou jian da chang gan jun （Escherichia coli）er he gan suan huan hua mei （dinucleotide cyclase V, DncV）chong zu biao da zai ti ,jing yi bing ji -β-D-liu dai ban ru tang gan （isopropy-β-D-thiogalactoside, IPTG）you dao biao da he Hisqin he chun hua huo de mu de dan bai DncV;li yong chao gao xiao ye xiang se pu （ultra performance liquid chromatography, UPLC）jian ce DncVchong zu dan bai ti wai cui hua GTPsheng cheng c-di-GMPde fan ying 。yan jiu jie guo biao ming ,IPTGyou dao xing biao da zai ti pET-28a-His-DncVgou jian cheng gong ,qin he chun hua huo de de DncVchong zu dan bai chun du da dao 92%;gai chong zu dan bai neng gou tong guo mei cu fan ying yi bu sheng cheng c-di-GMP;jin shu li zi dui gai mei huo xing ying xiang xian zhe ,ji zhong 3chong jin shu li zi (Mg2+, Mn2+, Co2+)ke di gao cui hua xiao lv ,ling wai 7chong jin shu li zi (Cu2+, Zn2+, Ni2+, Mo2+, Bo2+, Fe2+, Ca2+)yi zhi mei cu fan ying 。ben yan jiu jian li le E. coli DncVchong zu dan bai cui hua ge cheng c-di-GMPde fang fa ti ji ,wei c-di-GMPde da gui mo zhi bei he gong neng yan jiu di gong le ji chu zi liao 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自农业生物技术学报的贾宾,张维,郭豫杰,孔江南,杨雪宸,庞博文,杨国宇,郑悦亭，发表于刊物农业生物技术学报2019年07期论文，是一篇关于大肠杆菌论文,生物合成论文,重组表达论文,酶促反应论文,农业生物技术学报2019年07期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自农业生物技术学报2019年07期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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