DHX32和FLIP在结直肠癌中的表达及其临床意义

论文摘要

目的①建立检测DHX32 mRNA、FLIP（L） mRNA以及FLIP（S） mRNA实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ-RT-PCR）方法。②了解DHX32和FLIP在结直肠癌的表达情况及其临床意义。③揭示DHX32和FLIP的关系,探索它们在结直肠癌发生发展中的作用。方法①根据基因数据库和TaqMan实时荧光定量分析原理,应用primer express 2.0软件设计特异针对DHX32、FLIP（L）和FLIP（S）的引物和TaqMan探针。②优化反应条件并进行方法学评价,建立检测DHX32、FLIP（L）和FLIP（S） FQ-RT-PCR的方法。③收集34对新鲜结直肠癌组织及癌旁正常组织和14例结直肠癌组织,提取组织总RNA,逆转录为cDNA,以管家基因β-actin为内标基因,进行实时荧光定量PCR反应,检测各样本中DHX32、FLIP（L）以及FLIP（S）基因的表达水平。④DHX32和FLIP的表达水平结合结直肠癌临床病理特征资料进行分析。结果①成功建立了检测DHX32 mRNA FQ-RT-PCR方法,扩增效率为0.85,特异性好,重复性高（批内和批间CV为1.85%和2.95%）。②75%癌组织和26.4%癌旁组织有DHX32表达。结直肠癌组织中DHX32 mRNA表达明显高于癌旁组织（P<0.05）。③DHX32 mRNA表达水平与结直肠癌组织学分级、DUKES临床分期、癌栓形成以及淋巴结转移关系密切（P<0.05）。肿瘤的恶性程度越高,DHX32表达水平越高。④成功建立检测FLIP（L） mRNA和FLIP（S） mRNA FQ-RT-PCR方法,扩增效率为0.89和0.88,特异性好,重复性高（批内和批间CV均小于3%）。⑤所有癌组织和癌旁组织都有FLIP mRNA表达。结直肠癌组织中FLIP mRNA表达明显高于癌旁组织（P<0.05）。⑥FLIP mRNA表达水平在结直肠癌组织学分级分组中有显著差异（P<0.05）。肿瘤分化越低,其表达水平越高。⑦DHX32表达水平和FLIP表达水平相关（P<0.01）,相关系数r =-0.597。⑧FLIP mRNA中FLIP（L）/FLIP（S）比值与DHX32存在负相关（r =-0.326, P=0.025）。结论①荧光定量RT-PCR检测DHX32 mRNA、FLIP（L） mRNA以及FLIP（S） mRNA FQ-RT-PCR具有敏感、特异、快速、稳定等特点,为检测DHX32、FLIP（L）以及FLIP（S）提供了有效的手段。②DHX32 mRNA在结直肠癌组织中高表达,并与结直肠癌组织学分级、DUKES分期、癌栓形成以及淋巴结转移密切相关,提示DHX32可以作为肿瘤恶性程度评价的参考指标。③FLIP mRNA在结直肠癌组织中高表达,并与结直肠癌组织学分级关系密切,可能通过阻断凋亡通路参与结直肠癌的发生。④DHX32与FLIP关系密切,共同参与结直肠癌的发生发展。

论文目录

• 英文缩略表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料和试剂
• 1. 研究对象
• 2. 主要实验试剂
• 3. 主要实验仪器
• 4. 主要实验器具的处理
• 5. 主要试剂的制备
• 实验方法
• 1. FQ-RT-PCR 方法的建立
• 2. 引物和探针的设计
• 3. 组织中总RNA 提取
• 4. RNA 样本的定量分析
• 5. RNA 样本的完整性分析
• 6. cDNA 的合成
• 7. 实时荧光定量RT-PCR 检测DHX32 mRNA、FLIP（L） mRNA 和FLIP（S） mRNA
• 8. 实时荧光定量RT-PCR 方法的重复性和特异性测试
• 9. 实时荧光定量RT-PCR 检测临床标本
• 10. 数据处理
• 11. 实验结果的统计学分析
• 实验结果
• 1. 总RNA 的纯度和完整性分析
• 2. 实时荧光定量RT-PCR 扩增产物鉴定
• 3. 实时荧光定量RT-PCR 检测DHX32、FLIP（L）和FLIP（S）方法的实现
• 4. 重复性和特异性验证
• 5. 实时荧光定量RT-PCR 的扩增效率检测
• 6. DHX32 和FLIP 在结直肠癌及癌旁组织的表达情况
• 7. 结直肠癌组织 DHX32 和 FLIP 的表达与临床病理特征的关系
• 8. 结直肠癌组织DHX32 和FLIP 表达的关系
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 综述
• 参考文献