论文摘要
本实验应用PCR 法成功从原核表达载体pET28a-LG4-5 中获得了LG4-5 基因。构建重组克隆质粒pMD18-T-LG4-5,测序结果表明本实验获得LG4-5基因与Genbank中人层粘连蛋白α4链LG4-5基因序列的同源性为99.7%。应用定向克隆技术,成功构建了LG4-5 基因插入酵母表达重组载体pGAPZαA-LG4-5,利用电击法将转化毕赤酵母SMD1168,用Zeocin 抗性和PCR 法筛选阳性克隆,表达上清进行SDS-PAGE 和Western 印迹检测,利用Dot-blot 和ELISA 法选择最佳表达菌株和最佳表达时间。表达上清经Hitrap Chelating HP（5ml）亲和层析柱纯化,浓缩后,进行SDS-PAGE、Western 印迹和细胞粘附实验检测,结果表明,本实验获得目的蛋白LG4-5具有生物学活性, 为进一步揭示人层粘连蛋白的活性位点和其发挥功能的分子机制打下基础。
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