温病湿热证模型制作及清热化湿方对内毒素转导信号的动态干预

论文摘要

1 目的 本课题以中医基础理论为依据，采用多因素复合造模方法，通过观察模型大鼠的免疫、代谢的变化，并通过方药反证，对湿热证模型进行评价。以该模型为基础，通过观察细胞内毒素特异性受体LBPmRNA、CD14mRNA、TLR4mRNA、NF-κBp65表达变化，深入探讨湿热致病机理及清热化湿方的治疗机制。 2 方法 模型制作方面，采用复合因素造模，用清热燥湿方对模型进行干预，分别运用放免法观察SIgA、IL-1、TNF-a，GAS、MTL；直接法测定HDL-c、LDL-c；定磷法测肝线粒体Na+-K+-ATPase活性，对湿热证大鼠模型进行评价。并采用逆转录-聚合酶链反应技术（RT-PCR）检测各组大鼠肝巨噬细胞LBPmRNA、CD14mRNA和TLR4mRNA表达；采用免疫组化技术检测：各组大鼠肝巨噬细胞NF-κBp65活化，以明确清热化湿方对模型大鼠内毒素转导信号相关蛋白分子受体的靶点，从细胞分子生物学层次对湿热致病机理进行探讨。 3 结果 3．1 湿热证模型的研制 结果表明，模型组大鼠的症状，体征变化，与中医学湿热证基本相符；模型组SIgA、TNF-α、IL-1β水平显著升高，与对照组比较无显著性差异；模型组HDL-c、LDL-c水平非常显著增高，与对照组比较HDL-c显著增高；模型组MTL水平显著升高，GAS水平显著降低，与对照组比较无显著性差异，而对照组与正常组比较无显著性差异；模型组肝线粒体Na+-K+-ATPase活性非常显著降低，与对照组比较无显著性差异。同时方药反证，使用清热化湿方治疗后，上述指标恢复正常，与正常组比较无显著性差异。结果说明，湿热证大鼠模型制作成功。 3．2 清热化湿方对湿热证模型内毒素转导信号的动态干预 在感染6小时、1 2小时、24小时等不同时相点模型组LBPmRNA、CD14mRNA、TLR4mRNA、NF-κB表达逐渐非常显著增强；模型组在6小时、12小时、24小时等不同时相点之间比较均有显著性差异，说明随着病程的发展，湿热模型LBPmRNA、CD14mRNA、TLR4mRNA、NF-κB表达逐渐增强。12h治疗组与模型组比较：CD14mRNA、TLR4mRNA、NF-κB表达减弱有非常显著性差异，24h治疗组与模型组比较：LBPmRNA、CD14mRNA、TLR4mRNA、NF-κB表达减弱有非常显著性差异。且治疗组12h与6h比较以及24h与12h比较，LBPmRNA、CD14mRNA、TLR4mRNA表达均显著减弱，具有非常显著性差异，但治疗组6h或24h与正常组比较仍有极显著性差异，说明LBPmRNA、CD14mRNA、TLR4mRNA遏制衰减是一个缓慢的过程。而治疗组NF-κB激活6小时、12小时、24小时各时相点间比较均无显著性差异；且与正常组比较NF-κB激活均无显著性变化。说明清热化湿方对内毒素转导信号及核因子NF-κB的激活具有较好的干预抑制作用，中止炎症介质的转录，限制急性炎症反应等作用。 4 结论 4．1 温病湿热证模型研制的实验研究

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩略词
• 前言
• 上篇 湿热证的理论研究
• 1 湿热病证古代文献研究
• 2 湿热证理论研究
• 2.1 病因与发病
• 2.2 病机
• 2.3 辨证论治
• 2.3.1 辨证要点
• 2.3.2 治疗原则
• 3 湿热证的现代研究
• 3.1 湿热证病因研究
• 3.2 动物模型研究
• 3.3 在实验指标方面
• 4 湿热证研究的评述及展望
• 4.1 对病因的认识有待进一步完善
• 4.2 对造模方法有待进一步完善
• 4.3 对模型观察指标研究有待全面深入
• 5 细胞内毒素受体信号转导机制研究新进展的启迪
• 5.1 细胞内毒素受体信号转导机制研究新进展
• 5.2 内毒素生物活性影响因素
• 5.2.1 脂蛋白
• 5.2.2 湿热环境
• 6 本研究立题依据、思路、构建设想
• 主要参考文献
• 中篇 温病湿热证模型制作的实验研究
• 第一部分 温病湿热证的动物模型制作
• 实验一 温病湿热证的大鼠模型的制作研究
• 1 实验材料
• 2 实验方法及过程
• 3 症状体征观察
• 4 讨论
• 4.1 模型制作的理论依据
• 4.2 模型制作条件的分析
• 主要参考文献
• 实验二 温病湿热证模型免疫功能实验
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 4、讨论
• 4.1 分泌型IgA
• 4.2 肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β
• 主要参考文献
• 实验三：温病湿热证模型脂质代谢实验
• 1 实验材料
• 2 实验方法及过程
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 主要参考文献
• 实验四 温病湿热证模型胃动素、胃泌素实验
• 1 实验材料
• 2 实验方法及过程
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 主要参考文献
• +-Na⁺-ATP酶活力实验'>实验五 湿热证模型肝线粒体K⁺-Na⁺-ATP酶活力实验
• 1 实验材料
• 2 实验方法及过程
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 主要参考文献
• 第二部分 温病湿热证的动物模型探讨与结论
• 1 关于湿热证模型病因模拟
• 1.1 中医对湿热证病因的认识
• 1.2 湿热证模型制作条件讨论
• 2 湿热证模型的评价
• 3 湿热证模型大鼠免疫功能的变化探讨
• 3.1 肿瘤坏死因子-α 白介素-1
• 3.2 分泌型IgA（SIgA）
• 4 湿热证模型大鼠胃动素、胃泌素的变化探讨
• +-Na⁺-ATPase的变化探讨'>5 湿热证模型大鼠肝细胞线粒体K⁺-Na⁺-ATPase的变化探讨
• 6 清热化湿方探析
• 结论
• 主要参考文献
• 下篇 清热化湿方对湿热证模型内毒素转导信号的动态干预
• 第一部分 清热化湿方对内毒素转导信号动态干预的实验研究
• 实验六 清热化湿方对湿热证模型大鼠LBPmRNA的动态干预
• 1 实验材料
• 2 实验方法及过程
• 3 LBPmRNA的检测：
• 3.1 肝组织总RNA的提取及鉴定
• 3.2 逆转录反应
• 3.3 PCR反应
• 3.4 PCR产物电泳及结果检测
• 4 统计学处理
• 5 实验结果
• 6 讨论
• 主要参考文献
• 实验七 清热化湿方对湿热模型CD14mRNA的动态干预
• 1 实验材料
• 2 实验方法及过程
• 3 CD14mRNA的检测
• 4 统计学处理
• 5 实验结果
• 6 讨论
• 主要参考文献
• 实验八 清热化湿方对湿热证模型TLR4mRNA的动态干预
• 1 实验材料
• 2 实验方法及过程
• 3 TLR4mRNA的检测
• 4 统计学处理
• 5 实验结果
• 6 讨论
• 主要参考文献
• 实验九 清热化湿方对湿热证模型NF-κB的动态干预
• 1 实验材料
• 2 实验方法及过程
• 3 NF-κB的检测
• 4 统计学处理
• 5 实验结果
• 6 讨论
• 主要参考文献
• 第二部分 清热化湿方对内毒素转导信号动态干预的探讨
• 1 湿热证的发生与内毒素转导信号
• 2 清热化湿方对内毒素转导信号的动态干预
• 结论
• 本课题研究特色
• 有待进一步深入研究和探讨
• 附：文献综述
• 附图一 各组大鼠肝组织巨噬细胞内毒素转导信号的动态表达
• 附图二 各组大鼠肝组织巨噬细胞NF-κB p65活化（免疫组化）
• 致谢