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抑制肿瘤生长及调节免疫功能联合基因治疗小鼠肝癌的实验研究

2020-11-23阅读(396)

抑制肿瘤生长及调节免疫功能联合基因治疗小鼠肝癌的实验研究

论文摘要

肝癌是最常见的恶性肿瘤之一，恶性程度高，预后差。随着分子生物学的发展，在肝癌的生物治疗中基因治疗已成为继手术、放疗、化疗后治疗肝癌最具潜力的方法之一。目前，国内外学者对肝癌的基因治疗虽然开展了广泛探索，但大多数仅局限于应用单基因进行治疗，抑瘤效果不理想；同时尚存在转基因载体毒性、基因治疗的靶向性或选择性作用等问题。为提高基因治疗的效果，降低转基因载体引起的毒副作用，本课题从抑制肿瘤生长及提高机体免疫双方面展开，并使用高生物安全性转移载体，探索了不同基因联合治疗肝癌的可能性，通过阻断肿瘤细胞血供、诱导肿瘤细胞凋亡及调节机体免疫功能不同作用方式，探讨更有效的基因联合治疗肝癌的模式。 肿瘤的生长维持及转移依赖于新生血管的形成，血管内皮抑素(Endostatin)通过选择性抑制肿瘤血管内皮细胞增殖，诱导其凋亡，可直接抑制肿瘤新生血管生成，减少血供，进而抑制肿瘤生长，但Endostatin并不能使肿瘤完全消退，仅能让肿瘤消退至休眠期。在此条件下，如再及时给予诱导肿瘤细胞凋亡的打击，将会产生更好的效果。TNF相关的凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducingligand，TRAIL)可以选择性的诱导肿瘤细胞凋亡，同时也能诱导新生血管内皮细胞凋亡与Endostatin有很好的协同作用。基于以上分析，本课题首次提出将Endostatin和TRAIL联合用于肝癌基因治疗的实验研究，采用目前已被美国FDA批准的唯一可用于人体实验的安全、低毒、低免疫原性真核表达质粒pVAX1为载体，构建表达人Endostatin和可溶性

论文目录

  • 目录
  • 中文摘要
  • ABSTRACT
  • 符号说明
  • 前言
  • 总体技术路线
  • 第一部分：pVAX-sEN、pVAX-sT的构建、体外活性检测及pUMVC3-mIL12体外表达、生物活性的检测
  • 第一节：pVAX-sEN、pVAX-sT的构建、体外活性检测
  • 技术路线
  • 材料与方法
  • 1 材料
  • 2 方法
  • 结果
  • 1 成功构建了重组载体pVAX-sEN、pVAX-sT
  • 2 pVAX-sEN、pVAX-sT体外有效表达Endostatin、sTRAILmRNA及蛋白
  • 3 pVAX-sEN、pVAX-sT体外活性的检测
  • 讨论
  • 第二节：pUMVC3-mIL12体外表达及活性的检测
  • 材料与方法
  • 1 材料
  • 2 方法
  • 结果
  • 1 pUMVC3-mIL12体外有效表达mIL-12 mRNA及蛋白
  • 2 pUMVC3-mIL12表达的mIL-12可增加NK细胞杀伤活性
  • 讨论
  • 小结
  • 第二部分：联合基因治疗肝癌荷瘤BALB／c鼠的实验研究
  • 第一节：裸DNA注射与脂质体复合物体内转染效果的比较
  • 技术路线
  • 材料与方法
  • 1 材料
  • 2 方法
  • 结果
  • 1 脂质体复合物和裸DNA体内转染的比较
  • 2 裸DNA和脂质体复合物瘤内应用可取得相同的抑瘤效果
  • 3 裸DNA与脂质体复合物相比血清内Endostatin表达无显著差异
  • 4 裸DNA与脂质体复合物均可抑制肿瘤血管生成两者相比无显著差异
  • 讨论
  • 第二节：pVAX-sEN与pVAX-sT联合在裸鼠体内实验
  • 技术路线
  • 材料与方法
  • 1 材料
  • 2 方法
  • 结果
  • 1 pVAX-sEN+pVAX-sT联合治疗组有效表达Endostatin、sTRAIL mRNA和蛋白
  • 2 pVAX-sEN与pVAX-sT联合应用可协同抑制体内肿瘤生长
  • 3 pVAX-sEN与pVAX-sT联合应用可协同诱导体内肿瘤细胞凋亡
  • 4 pVAX-sEN与pVAX-sT联合应用可协同抑制肿瘤内新生血管生成
  • 5 pVAX-sEN、pVAX-sT裸鼠体内应用无毒副作用
  • 讨论
  • 小结
  • 第三节：pVAX-sEN+pVAX-sT、pUMVC3-mIL12+pVAX-sEN、pUMVC3-mIL12+pVAX-sT不同基因联合对BALB／c荷瘤鼠体内治疗的实验研究
  • 技术路线
  • 材料和方法
  • 1 材料
  • 2 方法
  • 结果
  • 1 pVAX-sEN+pVAX-sT、pUMVC3-mIL12+pVAX-sEN、pUMVC3-mIL12+pVAX-sT联合有效表达Endostatin、sTRAIL、mIL-12 mRNA和蛋白,pUMVC3-mIL12+pVAX-sEN、pUMCV3-mIL12+pVAX-sT体内可以诱导IFN-γ表达
  • 2 pVAX-sEN+pVAX-sT、pUMVC3-mIL12+pVAX-sEN、pUMVC3-mIL12+pVAX-sT联合可协同抑制肿瘤生长
  • 3 pVAX-sEN+pVAX-sT、pUMVC3-mIL12+pVAX-sEN、pUMVC3-mIL12+pVAX-sT联合可协同诱导体内肿瘤细胞凋亡
  • 4 pVAX-sEN+pVAX-sT、pUMVC3-mIL12+pVAX-sEN、pUMVC3-mIL12+pVAX-sT联合可协同抑制肿瘤新生血管生成
  • 5 pVAX-sEN+pVAX-sT、pUMVC3-mIL12+pVAX-sEN、pUMVC3-mIL12+pVAX-sT联合应用后BALB／c鼠免疫状态的改变
  • 6 pVAX-sEN、pVAX-sT、pUMVC3-mIL12体内应用无毒副作用
  • 讨论
  • 小结
  • 附图
  • 参考文献
  • 致谢
  • 攻读学位期间发表的学术论文目录
  • 学位论文评阅及答辩情况表

    • 相关论文文献

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