论文摘要
Cap43基因在肺癌患者组织和血清中表达的相关性研究前言Cap43基因是具有特征性氨基酸结构序列的一种新基因，是在其C末端由十个氨基酸TRSRSHTSEG重复三次所组成的序列，同时它在众多的肿瘤组织中表达上调，其mRNA和蛋白一旦被诱导生成就会持续稳定高表达。以往的研究通过免疫组化和蛋白印迹技术发现Cap43蛋白在肺腺癌、脑胶质瘤等肿瘤组织中呈现稳定的高表达，而在正常细胞或组织中不表达或呈极低表达，实验研究人员根据这一研究结果来区分正常与异常的组织。为此我们对该蛋白在肺癌病人血清中的表达是否与其在肿瘤组织中的高表达具有同样的趋势产生了很大兴趣，我们拟采用定量血清学ELISA检测手段，利用它灵敏度高、特异性强、取材容易等优点来对血清样本进行检测。检测结果发现，通过定量检测15例肺癌病人和正常混合对照血清提示，肺癌组血清Cap4含量明显大于正常对照组（P＜0.001），且该蛋白在肺腺癌组表达明显高于肺鳞癌组（P＜0.01）。同时我们拟应用免疫组化S-P法对肺癌不同组织学类型中Cap43的表达进行检测，观察检测结果是否与血清学检测结果具有同样的趋势。目的采用双抗夹心ELISA和免疫组化方法分别检测肺癌患者血清和肿瘤组织中Cap43蛋白的表达含量，并进一步分析这两种检测结果之间有无相关性。方法1、制备实验所需的兔抗Cap43多克隆抗体；2、初步建立双抗体夹心ELISA法，定性和定量检测91肺癌患者与正常人群血清中各自的Cap43蛋白含量；3、采用免疫组化S-P方法检测对照组肺组织及83例肺癌术后患者的肿瘤组织中Cap43蛋白的含量。结果1、制备的兔抗Cap43多克隆抗体经初步纯化后效价为1：500；2、初步建立的双抗ELISA血清学检测方法中，确定的包被抗体羊抗人NDRG1多克隆抗体、Ⅰ抗兔抗人Cap43多克隆抗体、辣根酶（HRP）标记的羊抗兔Ⅱ抗的最佳工作浓度分别为，1：750、1：1200、1：350，标准蛋白曲线的回归方程为：为y=0.53566+0.00046x，R2=0.9939，P＜0.0001。应用该方法初步检测结果提示，肺癌组血清标本Cap43蛋白含量明显高于对照组（P＜0.01），且肺腺癌组病人血清Cap43含量高于肺鳞癌组（P＜0.01）；3、免疫组化检测结果提示，对照组中无Cap43蛋白表达，但肺癌组织中有Cap43蛋白的表达且肺腺癌组的Cap43表达含量要高于肺鳞癌组（P＜0.05）。结论1、初步建立了一种敏感度高，重复性好的定量检测血清中Cap43蛋白的双抗体夹心ELISA方法；2、应用该方法检测的肺癌患者血清中Cap43的表达含量以及肿瘤组织Cap43的表达含量均比正常组织高且含量高低与其肿瘤的组织学类型密切相关。