论文摘要
目的:观察谷氨酸与SAS对神经胶质瘤细胞的影响,并探讨线粒体氯通道蛋白/CLIC4及凋亡相关基因的变化。方法:应用四氮唑（MTT）比色法检测神经胶质瘤细胞的活性;紫外分光光度法检测细胞内还原型谷胱甘肽含量及培养液上清LDH释放率;用RT-PCR法测定C6细胞Bcl-2、Bax、CLIC4、EAAT-3、mGlu4、mGlu6的mRNA的表达;用Western blotting法测定C6细胞Bcl-2、Bax、CLIC4、p38、EAAT-3的蛋白表达。结果:1.SAS及谷氨酸可分别引起C6细胞生存率降低,SAS和谷氨酸联合添加细胞与单独添加组比较,细胞生存率降低更明显;2.SAS添加细胞LDH释放率明显增高,而谷氨酸组没有变化;3.谷氨酸和SAS分别添加细胞GSH含量均降低,合加组降低更加明显;4.加药后SAS1.5mmol/L添加C6细胞Bcl-2mRNA水平低于对照组,Bax无明显趋势,谷氨酸30mmol/L和合加组添加C6细胞的CLIC4mRNA水平低于对照组,SAS添加C6细胞的EAAT-3mRNA表达降低,谷氨酸30mmol/L添加C6细胞的mGlu4和mGlu6的mRNA表达均降低;5.SAS添加C6细胞CLIC4、Bax和p38的蛋白表达高于对照组,而Bcl-2低于对照组,其它组无变化,SAS添加C6细胞组EAAT-3蛋白表达降低。结论:1.谷氨酸和SAS均可引起C6细胞损伤,谷氨酸与SAS合加细胞损伤更为明显;2.氧化应激造成的GSH耗竭可能是谷氨酸和SAS引起C6细胞损伤的主要机制之一;3.LDH升高,Bcl-2表达降低,Bax表达增高,提示SAS可能诱导细胞凋亡为主,而谷氨酸引起细胞损伤过程中,以上指标无明显变化,提示谷氨酸可能诱导细胞坏死为主;4.SAS上调了CLIC4表达,CLIC4可能与凋亡有关,p38表达增高,提示p38MAPK信号通路可能参与了SAS导致细胞损伤及凋亡过程的传导通路;5.SAS引起EAAT-3和谷氨酸引起mGlu4、mGlu6表达降低可能也参与了上述细胞损伤调节过程,SAS和谷氨酸分别降低了其转运体及代谢型谷氨酸受体的保护作用,但其具体机制有待于进一步研究。