论文题目: 海洋粘细菌细胞行为及其分子机制研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 微生物学
作者: 张禹清
导师: 李越中
关键词: 耐盐粘细菌,分化发育,转导,耐盐机制,生存定殖模式
文献来源: 山东大学
发表年度: 2005
论文摘要: 粘细菌曾被普遍认为是典型的土壤细菌类群,主要是由于早先绝大部分粘细菌是从土壤生境中分离的,并且它们的多细胞行为和完整生活史也都是在固体介质表面上完成的。虽然,粘细菌在液体培养基中可以生长,但却一直未能证明水环境中有休眠细胞的发育。因此,尽管在水环镜中也偶有粘细菌分离的报道,但Reichenbach和Dawid认为,粘细菌是陆生的细菌类群,水环境中分离的粘细菌其实是从土壤中冲入水中,并以休眠状态存活的子实体中粘孢子的萌发物。 1998年Iizuka等根据16S rDNA序列与粘细菌中小囊菌属(Nannocystis)有89.3%和83.2%的同源性,认为从海洋中分离的两株嗜盐细菌为海洋粘细菌。1999年Ravenschlag等在构建海底沉积物细菌16S rDNA文库的基础上,通过特异性探针杂交方法证明在其分析的样品中可能存在粘细菌的类群。我们通过特殊的分离方法也在海洋样品中分离并纯化得到了耐盐生长的多株粘细菌。由于海水条件下并不能提供粘细菌分化发育形成子实体的自然环境,也不能保证粘孢子的高密度从而开始一个新的生命周期。这些“海洋”粘细菌在海水环境里是如何存活并定殖的?这成为了一个令人感兴趣并且富有挑战性的课题。 本文在充分研究了分离得到的海洋耐盐粘细菌的分类特征的基础之上,将其同一株嗜盐海洋粘细菌(Haliangium ochraceum SMP-2)进行了微生物学性质的比较分析,包括在海水和淡水的固体及液体培养基中生长和发育相关特征,生长后期的球形细胞的抗逆性质和细胞密度依赖性差异等方面。在国际上首次报道了这一类群粘细菌的在海洋和陆地生境中可能具备的不同的生活方式和分化发育周期,提出了粘细菌在海洋生境存活并定殖的可能模式,为揭示粘细菌的起源进化提供了线索。 耐盐粘球菌HW-1、128-7、125-1和125-10-1均分离自海洋样品,其中HW-1和125-10-1可以耐受全海水生长。依据粘细菌的经典形态学分类方法,对其进行初步分类鉴定。详细研究了这几株耐盐粘细菌的细胞形态学特征,包括营养细胞的形状和大小、粘孢子的形态和大小、子实体的形态、菌落的形态、色素等。在测定G+Cmol%时,对化学水解(高氯酸法和甲酸法)和生物酶水解(磷酸二酯酶Ⅰ和牛肠粘膜碱性磷酸酶)DNA的水解条件和产物进行了分析,改善了分
论文目录:
摘要
ABSTRACT
第一部分 文献综述
1．1 粘细菌概论
1．1．1 粘细菌的分类定位
1．1．2 粘细菌的分化发育和细胞行为
1．1．3 粘细菌的活性次级代谢产物
1．2 粘细菌的生态学研究
1．2．1 粘细菌的自然生境概述
1．2．2 粘细菌的分离纯化
1．2．3 粘细菌在土壤中的全球分布
1．2．4 极端生境中的粘细菌
1．3 海洋粘细菌以及耐盐微生物的耐盐机理
1．3．1 海洋粘细菌
1．3．2 耐盐微生物的耐盐机理
1．4 粘细菌遗传学研究方法
1．4．1 基因组序列测定及相关信息
1．4．2 粘细菌的基因操作和突变体的基因图谱
1．4．3 Myxococcus xanthus突变体的获得与鉴定方法
1．4．4 Myxococcus xanthus基因克隆与分析
1．5 本文工作开展的思路
第二部 耐盐粘细菌微生物学性质分析
2．1 材料和方法
2．1．1 菌株
2．1．2 仪器
2．1．3 试剂
2．1．4 培养基
2．1．5 实验方法
2．2 结果和分析
2．2．1 耐盐粘细菌的形态学特征
2．2．2 耐盐粘细菌G+C mol%测定
2．2．3 耐盐粘细菌16SrDNA序列测定及分析
2．2．4 系统分类分析
2．2．5 耐盐粘细菌的培养性质分析
2．2．6 耐盐粘细菌的孢子抗逆性质分析
2．2．7 耐盐粘细菌生长的细胞密度依赖性分析
2．3 小结-耐盐粘细菌的生活模式
第三部分 P1::Tn5 lac对耐盐粘球菌的转导及其相关我的遗传学分析
3．1 材料和方法
3．1．1 菌株
3．1．2 仪器
3．1．3 试剂
3．1．4 培养基
3．1．5 实验方法
3．2 实验结果及分析
3．2．1 噬菌体(P1::Tn5 lac)对耐盐粘球菌的转导及突变体库的建立
3．2．2 转导突变株的验证
3．2．3 转导子突变表型检测及性质分析
3．2．4 TAIL-PCR法分离转导子Tn5 lac插入基因
3．3 小结
参考文献
致谢
在读博士期间发表的论文
发布时间: 2005-10-17
参考文献
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