基因工程化神经干细胞结合组织工程材料治疗周围神经损伤的实验研究

论文题目: 基因工程化神经干细胞结合组织工程材料治疗周围神经损伤的实验研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 组织学和胚胎学

作者: 程赛宇

导师: 阮怀珍

关键词: 基因工程,组织工程,神经干细胞,胶质源性神经营养因子,壳聚糖,坐骨神经

文献来源: 第三军医大学

发表年度: 2005

论文摘要: 神经损伤的再生修复一直是神经科学研究的难点和焦点。近年来,随着交通事故和创伤的逐年上升,由此引起的神经损伤,尤其是外周运动神经损伤日益增多,其特点为致残率高,危害性大。由于缺乏治疗神经损伤的理想药物,临床上仅能将断裂的神经吻合,其结构及功能的恢复很不理想。如何有效的治疗外周神经损伤,特别是较长距离的神经损伤,使之有效的实现功能恢复,这也是当前神经科学研究中亟待解决的问题之一。目前的研究表明,周围神经损伤后虽有一定的自我再生能力,但良好的再生修复更需要神经营养因子(neurotrophic factors,NTFs)、基质和神经细胞这三方面因素的协同作用来实现。胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)对多巴胺神经元、运动神经元等多种神经元均具有促进存活和损伤保护的作用,极有希望用来治疗神经损伤和神经系统退行性病变。实施基因治疗将GDNF植入损伤局部,使之持续表达分泌GDNF,就解决了外源性给药作用时间短等的不足。基因治疗要选择适宜的载体细胞。神经干细胞(neural stem cells,NSCs)能在体外大量增殖,并可诱导分化为神经系统的主要细胞——神经元和胶质细胞。因此,NSCs成为基因治疗理想的载体细胞。同时组织工程材料壳聚糖与组织有较好的相容性,能被组织吸收,更能抑制成纤维细胞的生长,防止瘢痕形成,因此它也是应用于神经损伤治疗中的理想材料。本实验运用细胞培养技术、基因转染技术、流式细胞计数、免疫组织(细胞)化学技术、HRP逆行示踪、坐骨神经功能指数,膜片钳电生理技术等方法,分离、培养大鼠大脑皮层NSCs,观察NSCs与壳聚糖、雪旺细胞(Schwann’s cells,SCs)共培养条件下生长、分化的情况。并将GDNF基因在体外转染到NSCs中,筛选、扩增后移植到经过壳聚糖管套接的大鼠坐骨神经离断模型中,以满足神经再生修复的三大因素,观察评价治疗效果,为损伤神经的治疗探索新的可行性。主要结果如下: 1.本实验分离、培养胚胎大鼠大脑皮层NSCs。细胞呈球状悬浮生长,细胞克隆

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论文全文基因工程化神经干细胞结合组织工程材料治疗周围神经损伤的实验研究

前言

总材料与试剂

第一部分大鼠大脑皮层神经干细胞的分离培养及其与壳聚糖、雪旺细胞共培养的实验研究

材料及方法

结果

讨论

小结

第二部分 GDNF基因逆转录病毒表达载体的构建及基因转染神经干细胞的研究

材料及方法

结果

讨论

小结

第三部分 GDNF基因修饰的神经干细胞联合壳聚糖再生管治疗大鼠坐骨神经损伤的实验研究

材料及方法

结果

讨论

小结

主要参考文献

照片

致谢

文献综述神经干细胞增殖分化的调节机制及其治疗神经系统疾病的研究进展

参考文献

学习期间发表和交流的文章

发布时间: 2005-11-08

参考文献

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基因工程化神经干细胞结合组织工程材料治疗周围神经损伤的实验研究

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