论文摘要
目的:制备碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)的可降解明胶缓释微球,考察其生物活性的保存情况及它们对内皮细胞(EC)的作用;并将其作用于大鼠背部任意皮瓣,考察生长因子缓释剂及不同比例生长因子共同作用对皮瓣存活的影响。方法:采用改良的乳化冷凝法交联制备复合bFGF、VEGF的明胶缓释微球,在显微镜下测量其表观性状、包封率、载药率并用动态透析法测量其缓释特性;将它们加入内皮细胞的培养液中,用细胞计数法、四甲基偶氮唑盐微量反应比色法(MTT法)测定内皮细胞的增殖情况及活力;并将其注射于大鼠背部任意皮瓣,分别进行皮瓣存活率、新生血管计数及皮瓣血流量的检测。结果:复合明胶缓释微球平均粒径为11. 32±3. 64μm; bFGF平均载药率及包封率为0.26%,90.6%,VEGF平均载药率及包封率为0.22%,88.4%。7天后测量累积释放率分别为93.1%和90.6%。将其作用于培养的内皮细胞,bFGF及VEGF缓释微球组细胞计数为24.0±2.16,29.16±3.65,吸光度(A)为0.756±0.042,1.023±0.106,与对照组细胞计数18.74±2.21,吸光度(A) 0.651±0.064相比差别具有统计学意义(P<0.05)。两种因子合用细胞计数为34.51±4.79,吸光度(A)为1.328±0.098,明显高于对照组及生长因子单独作用(P<0.05)。将其注射于大鼠背部任意皮瓣,术后7天皮瓣的存活率分别为45.43±2.71%;58.45±2.70%;68.54±2.79%;54.38±4.52%;65.42±2.19%;63.75±2.24%;78.33±3.23%,缓释剂组存活率显著高于对照组及单纯生长因子组(P<0.05),且联合使用两种因子皮瓣存活质量最好;皮瓣内毛细血管密度分别为18.68±5.44;25.41±4.06;31.16±4.38;21.28±3.82;28.75±2.36;32.74±4.67;39.32±3.73,较对照组具有显著差异性(P<0.05)。两种不用比例因子合用皮瓣存活率及毛细血管分别为VEGF/bFGF =1:1组:63.75±2.24%,32.74±4.67;VEGF/ bFGF =1:2组65.79±3.48%,35.67±3.25;VEGF/ bFGF =1:3组77.5±3.95%,40.38±4.19。结论:1.利用改良的乳化冷凝法制备的复合明胶缓释微球是一种简便、有效的加工办法。制备工艺简便,微球径粒均匀,载药率高,具有良好的缓释活性,载体明胶对组织细胞无毒副作用。2.复合明胶微球能显著延长生长因子的半衰期,促进内皮细胞的增殖及任意皮瓣的血管化进程,促进皮瓣的存活,是控释药物延长药物作用时间,减少用药剂量的好方法。3.bFGF及VEGF具有协同作用,联合使用能显著加快其血管化促进缺血皮瓣存活,并减少用药剂量,剂量是3:1比例时产生很强的协同作用。
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