大肠杆菌O157:H7 PCR检测方法的建立及初步应用

论文摘要

大肠杆菌0157∶H7(Escherichia coli0157∶H7)为一种危害严重的食源性致病菌,可使人感染患腹泻、出血性结肠炎(hemorrhagic colitis,HC),还可在5~10%的病例中引发溶血性尿毒综合症(hemolytic uremic syndrome,HUS)及血栓性血小板减少紫癜(thrombotic thrombocytopenic purpura,TTP)等严重并发症,严重者可导致死亡。EHEC0157∶H7的感染因具有暴发流行趋势、强烈的致病性与致死性和抗生素治疗可加剧病情的危险性等特点,已经成为全球性的公共卫生问题。我国已将肠出血性大肠杆菌列为21世纪可能对国人卫生健康有重大影响的12种病原微生物之一。同时,0157∶H7菌培养容易、繁殖迅速、感染力强、感染途径广泛,使之极有可能作为未来军事斗争中的细菌战剂和生物恐怖战剂。美国疾病预防控制中心(CDC)已将EHEC 0157∶H7菌列为B类生物恐怖病原体严加防范。近20年来给世界各国带来了巨大影响。本文对其进行了微生物特点鉴定、定性和建立多重聚合酶链式反应(PCR)以及运用其技术进行检测的研究。首先对其进行微生物学培养和检测,熟悉大肠杆菌0157∶H7的基本生物学特性,并掌握用山梨醇麦康凯培养基(SMAC)初步鉴定0157∶H7的方法。其次,针对其特异性致病基因stx1,stx2和特异性鞭毛基因flic设计3对引物,建立多重PCR反应体系,进行PeR检测,结果表明3对引物皆可以有效扩增且具有良好的特异性。通过优化试验条件确定其最适退火温度为57℃,反应的最佳引物浓度为1umol/l,DNA模板3ul。,并且6小时就可以检测出样本是否含有O157:H7。第三,通过已建立的多重PCR检测技术,检测长春地区春、夏两季肉蛋奶市场,共检测肉类样本180份,牛奶样本72份,鸡蛋样本20份,共检测出肉类样本5份,其中春季一份,夏季4份,牛奶,鸡蛋,品牌猪牛肉均没有发现O 157:H7的污染。

论文目录

• Abstract
• 摘要
• 第一章 前言
• 1.1 大肠杆菌的致病机制
• 1.2 大肠杆菌0157:H7的研究进展
• 1.3 研究的目的和意义
• 第二章 大肠杆菌0157:H7多重PCR反应体系的建立
• 2.1 材料与方法
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 第三章 大肠杆菌0157:H7多重PCR的初步应用析
• 3.1 材料及方法
• 3.2 多重PCR检测
• 3.3 检测结果
• 3.4 讨论
• 3.5 小结
• 第四章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介